（樣本堿水解法）

玻璃試管，移液器，可見光分光光度計，可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱（或者鋁鍋內(nèi)放幾個 去掉蓋子的易拉罐，將罐壁及底部穿數(shù)十個孔，以便水的進(jìn)入，用來代替水浴箱。），離心機(jī)。

二、操作步驟： 樣本前處理：

1、樣本水解：

①、血清（漿）：取  0.5ml  血清（漿）準(zhǔn)確加水解液  1ml，混勻。放試管中加蓋后，95℃或 者沸水浴水解 20 分鐘。

②、尿液（培養(yǎng)液）：取 1.0ml 尿液（培養(yǎng)液）準(zhǔn)確加水解液 1ml，混勻。放試管中加蓋后，

95℃或者沸水浴水解 20 分鐘。

③、組織：稱取組織濕重  30～100mg  放入試管中，準(zhǔn)確加水解液  1ml，混勻。加蓋后

95℃或者沸水浴水解 20 分鐘（水解 10 分鐘時混勻一次，目的是使水解更充分）。

2、調(diào) PH 值至 6.0～6.8 左右。

①、將各試管流水冷卻后各管加指示劑 1 滴，搖勻；

②、各管準(zhǔn)確加入調(diào) PH 甲液 1.0ml，混勻（此時溶液應(yīng)為紅色）；

③、用 200μl 的加樣器吸取調(diào) PH 的乙液向各管內(nèi)逐滴小心加入調(diào) PH 的乙液，每滴加入后 均要混勻*，直至液體中指示劑的顏色變成黃綠色**。此時 PH 值在 6.0～6.8 左右（約 加入調(diào) PH 乙液 100μl～500μl 左右）；

*  加調(diào)  PH  乙液時，每加一滴均要混勻，為防止液體外溢，如果沒有帶蓋的玻璃磨口試管，可用普通

玻璃試管代替，每次混勻時可用塑料薄膜或冰箱保鮮膜壓住試管口，充分旋渦混勻即可。

**若您的樣本是細(xì)胞培養(yǎng)液，因其中含有酚紅，所以液體中的混合指示劑在 PH 為 6.0～6.8 左右時為 橙黃紅色，而不是黃綠色。

④、然后加蒸餾水至 10ml，混勻；

⑤、取 3～4ml 稀釋的水解液加適量活性炭（約 20～30mg 左右，以上清液離心后澄清無色 為準(zhǔn)），混勻，3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘，小心取上清 1ml 作檢測。

操作表：

混勻，靜置 10 分鐘

混勻，靜置 5 分鐘

混勻，60℃水浴 15 分鐘，冷卻后，3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘，取上清在 550nm 處，1cm 光 徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度。

1

三、計算與舉例：

（一）、血清（漿）的計算與舉例：

1、計算公式：

羥*含量     測定管吸光度 − 空白管吸光度    標(biāo)準(zhǔn)管含量    水解液總體積（ml ）

=                                                     ×                       ×

（ug / ml）

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度 − 空白管吸光度

（5ìg/ml）

取樣量（ml ）

（二）、尿液的計算與舉例：

1、計算公式：

羥*含量     測定管吸光度 − 空白管吸光度    標(biāo)準(zhǔn)管含量    水解液總體積（ml ）

=                                                     ×                       ×

（ug / ml）

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度 − 空白管吸光度

（5ìg/ml）

取樣量（ml ）

（三）、組織的計算與舉例：

1、計算公式：

羥*含量     測定管吸光度 − 空白管吸光度    標(biāo)準(zhǔn)管含量    水解液總體積（10ml ）

=                                                      ×                       ×

（ug / mg濕重）

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度 − 空白管吸光度

（5ìg/ml）

組織濕重（mg ）