大鼠高香草酸elisa試劑盒操作步驟：

1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。

2. 分組：取出 96 孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。 注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul 的待測樣本。

4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）。

5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標(biāo)板 5 次，用吸水紙*拍干。 7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。

9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。 注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應(yīng)后的 30 分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。

數(shù)據(jù)計(jì)算

1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：各標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值減去底色即減去空白孔 OD 值，以 6 個標(biāo)準(zhǔn) 品的 OD 值為縱坐標(biāo) y，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo) x，繪制曲線圖，如圖示， 并計(jì)算出回歸方程 y=ax+b。

2. 將待測樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算各組樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即 為樣品的實(shí)際 ABP 濃度。

3. 敏感度：1.0 pg/ml