Y190 感受態(tài)細(xì)胞操作方法：  

1.Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50規(guī)格取100μl冰上融化的DH5α感受態(tài)細(xì)胞，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。  隨后，為了確保DNA能夠有效進(jìn)入感受態(tài)細(xì)胞，我們需要執(zhí)行一個(gè)關(guān)鍵的熱激步驟。將含有DNA的感受態(tài)細(xì)胞混合物迅速轉(zhuǎn)移到預(yù)先加熱至42°C的水浴中，精確計(jì)時(shí)90秒。這一短暫的高溫處理能夠暫時(shí)性地改變細(xì)胞膜的通透性，允許外源DNA通過。完成熱激后，立即將試管重新放回冰上，靜置2-3分鐘，使細(xì)胞膜恢復(fù)其原有的穩(wěn)定性，防止DNA的泄漏。

接下來(lái)，為了復(fù)蘇細(xì)胞并表達(dá)抗性基因（如果質(zhì)粒攜帶的話），需要向管中加入800μl無(wú)抗生素的LB培養(yǎng)基，并置于37°C搖床中，以200-250rpm的速度溫和振蕩培養(yǎng)45分鐘至1小時(shí)。此過程中，細(xì)胞開始分裂并表達(dá)任何可能已轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒上的基因，包括可能賦予抗生素抗性的基因。

培養(yǎng)結(jié)束后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，我們可以將細(xì)胞懸液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后取一定體積（如100μl）涂布到含有相應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板上。使用無(wú)菌的玻璃涂布器輕輕均勻地涂抹，確保細(xì)胞均勻分布。之后，將平板倒置放在37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，通常為12至16小時(shí)。

次日，觀察平板上菌落的形成情況。如果轉(zhuǎn)化成功，我們將看到清晰可見的、大小均一的菌落生長(zhǎng)，這些菌落即為成功導(dǎo)入了目的DNA的DH5α細(xì)胞克隆。至此，感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)便告一段落，接下來(lái)的步驟將根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行質(zhì)粒提取、酶切驗(yàn)證或進(jìn)一步的分子生物學(xué)分析。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。  

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。  

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)  

抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1.Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50規(guī)格感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。  

2.混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。  

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。