99爱免费_精品一区二区无码AV_欧美屁股xxxxx_日批视频国产_AV天堂亚洲区无码先锋影音_特黄A又粗又大又黄又爽A片

產品推薦:水表|流量計|壓力變送器|熱電偶|液位計|冷熱沖擊試驗箱|水質分析|光譜儀|試驗機|試驗箱


儀表網>技術中心>使用指南>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

實驗常見問題分析與解決方案

來源:上海金鵬分析儀器有限公司   2024年05月21日 08:32  
上海金鵬分析儀器有限公司針對WB做不好的常見問題分析與解決方案:
問題可能原因驗證或解決辦法
 
 
 
 
 
背景較高
封閉不充分延長封閉時間,更換合適的封閉劑(脫脂奶粉,BSA,血清等)
一抗濃度過高增加一抗稀釋倍數,
抗體孵育溫度過偏高建議4℃孵育
二抗非特異性結合
或與封閉劑交叉反應
設置二抗對照(不加一抗),降低二抗濃度
一抗或二抗與封閉劑有交叉反應在孵育和洗滌液中加入Tween-20以減少交叉反應.
洗膜不充分增加洗滌次數
膜不合適NC膜比PVDF膜背景低
膜干燥保證充分的反應液,避免出現干膜現象
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
沒有陽性條帶 或很弱
 
一抗、二抗等不匹配
訂購試劑時認真選取一抗與組織種屬, 一抗與二抗或/和底物與酶 系統之間相匹配的抗體及底物。可通過設置內參可以驗證二級檢測 系統的有效性。
-抗或/和二抗濃度低增加抗體濃度,延長孵育時間
封閉劑與一抗或二抗有交叉反應封閉時使用溫和的去污劑,如TWEEN20,或更換封閉劑(常用的 脫脂奶、BSA、血清或明膠
一抗不識別目的物種的靶蛋白檢查說明書,或做ClustalW比對,設陽性對照
樣本中無靶蛋白或靶蛋白含量過 低(抗原無效)設置陽性對照,如果陽性對照有結果,但標本沒有則可能是標本中 不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。后者可增加標本上樣量至少每孔   20-30ug蛋白,樣本制備時使用蛋白酶抑制劑,或分級提取目的蛋白。
轉膜不充分,或洗膜過度使用麗春紅S檢測轉膜效果,PVDF膜需浸透,需正確的轉膜操作,勿 過度洗膜
過度封閉使用含0.5%脫脂奶或無脫脂奶的抗體稀釋液,或更換封閉劑,減少 封閉時間
一抗失效使用有效期內抗體,分裝保存,避免反復凍融取用,工作液現配現用
二抗受疊氮鈉抑制所用溶液和容器中避免含有疊氮鈉(HRP的抑制劑)
酶和底物失效直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了、選擇在有 效期內、有活性的酶聯物,使用新鮮的底物.
曝光時間過短延長曝光時間
 
 
 
 
 
 
多非特異性條 帶
或條帶位置不 對
細胞傳代次數過多,使其蛋白表 達模式的分化使用原始或傳代少的細胞株,或平行實驗
體內表達的蛋白樣本具有多種修 飾形式:乙酰化、磷酸化、甲基 化、烷基化、糖基化等 
查文獻,使用去修飾的試劑使蛋白恢復其正確的大小
蛋白樣本降解使用新鮮制備的標本,并使用蛋白酶抑制劑
新蛋白或同族蛋白的分享同種表 位的不同剪接方式查其它文獻報導,或BLAST搜尋,使用說明書報導的細胞株或組織
一抗濃度過高降低抗體濃度,可以減少非特異性條帶
二抗濃度過高產生非特異性結合降低抗體濃度,增加二抗對照
選擇特異性更強,只針對重鏈的二抗
抗體未純化使用單克隆或親和純化的抗體,減少非特異條帶
蛋白存在二聚體或多聚體SDS-PAGE電泳上樣前,煮沸10 min,
 
 
 
  以增強蛋白質解聚變性
背景有白色/黑 色斑點轉膜時有氣泡或抗體分布不均盡量去除氣泡,抗體孵育時保持搖動
抗體與封閉劑結合過濾封閉劑
暗片現白條帶一抗或二抗加入過多稀釋抗體的濃度
目的條帶過低/ 過高SDS-PAGE膠濃度選擇不合適調整膠濃度,分子量大的蛋白用低濃度膠,分子量小的蛋白用高濃 度膠
“微笑”條帶遷移過快,電泳溫度過高降低電泳速度,低溫電泳(冷室)
 
 
 
 
轉膜不充分
膜沒有均勻濕透使用99%methanol漫透膜
靶蛋白分子量小于10,000選擇小孔徑的膜,縮短轉移時間
靶蛋白等電點等于或接近轉移緩 沖液pH值|可嘗試使用其他緩沖液如CAPS緩沖液(pH10.5)或使用低pH值緩 沖液如乙酸緩沖液
 
甲醇濃度過高
過高甲醇濃度會導致蛋白質與SDS分離,從而沉淀在凝膠中,同
時會使凝膠收縮或變硬,從而抑制高分子量蛋白的轉移。降低甲醇 濃度或者使用乙醇或異丙醇代替
轉移時間不夠Thick gel對于厚的膠以及高分子量蛋白需要延長轉移時間

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:儀表網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-儀表網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:儀表網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其它來源(非儀表網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點或和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
聯系我們

客服熱線: 15267989561

加盟熱線: 15267989561

媒體合作: 0571-87759945

投訴熱線: 0571-87759942

關注我們
  • 下載儀表站APP

  • Ybzhan手機版

  • Ybzhan公眾號

  • Ybzhan小程序

企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87759942
主站蜘蛛池模板: 欧美人人|91精品久久久久久综合|日本一区二区三区视频视频|欧美老熟妇乱子伦视频|91精品国产99久久久久|国产不卡三区 | 狂躁美女大bbbbbb在线观看|亚洲=aV日韩=aV无码=a琪琪|BBW极度另类孕妇|中文资源在线官网|久久久久国产精品熟女影院|狠狠老司机 | 播放黄色一级片|国产精品久久久久久久久免费软件|国产XXXXXX农村野外|午夜网址|成人无高清96免费|精品高清视频 | 成在人线无码=aⅴ免费视频|毛片免费观看天天干天天爽|天天摸天天做天天爽水多|在线观看日本www|奇领6080奇领影院奇领yy6080在线观看|黄色片观看 | 99免费看香蕉视频|久久伊人蜜桃=av一区二区|激情五月开心综合亚洲|国产午夜一级片|一级片的网站|一本精品99久久精品77 | 国产婷婷综合在线视频中文|人人超人人超碰超国产97超碰|一区二区动漫|中国农村毛片免费播放|久久综合久久久久88|男女猛烈啪啪无遮挡免费观看 | 久久国产超碰女女=av|2019最新国产拍自产在线|日韩xxxxxxxxx|国产在线观看=av黑料在线不打烊|国产精品久久久乱弄|国产精品一区二区三区四区色 | 91免费版视频|在线观看人成激情视频|午夜激情视频免费|91麻豆精品国产综合久久久|日韩精品1|夜夜爱视频 | 全黄h全肉边做边吃奶流浪汉|#NAME?|日本高清二区视频久二区|国模少妇一区两区三区|2018中文字幕在线视频|亚洲=aV国产精品无码 | 玖玖久久|亚洲一级在线|久久久精品视频在线|亚洲精品伊人|欧美入口|不卡亚洲精品 | 精品视频在线一区二区在线|码亚洲中文无码=av在线|九九九国产精品成人免费视频|国产露脸对白88=av|天天艹日日干|中文字幕久久精品一二三区 | 办公室强行丝袜秘书啪啪|国产超薄丝袜足底脚交国产|校花被强糟蹋十八禁免费视频|国产一级纯肉体一级毛片|四虎影院网站|成人免费的视频 | 天天操天天爱天天干|日本中文字幕免费在线观看|国产精品久久毛片=a片软件爽爽|国产精品色=av|中文字幕第二十一页|日本护士大口吞精视频网站 | 东北寡妇特级毛片免费|99热精品国产一区二区在线观看|亚洲=aV永久纯肉无码精品动漫|国产成人一区二区三区|午夜=av一区二区|久久久久久久久久久动漫 国产1区在线观看|四房播播成人社区|嫩草影视亚洲|免费毛片在线不卡|久久亚洲精品国产一区最新章节|911免费看片 | 亚洲第一二区|国产高清乱理伦片中文|久久99精品久久久久久9|热久久网|成人精品视频免费|国产在线拍揄自揄视频不卡99 | 国内精品久久久久久TV|久久叉叉|动漫=av网|欧美巨猛xxxx猛交黑人97人|亚洲人免费视频|欧洲成年人性生活免费视频 | 成人免费高清|精品色呦呦|国产另类ts人妖一区二区|99热精品在线|国产人免费人成免费视频|欧美国产日韩二区 | 女女同性=aV片在线播放免费|91久久香蕉囯产熟女线看|在线观看国产日韩亚洲中|97se国产在线公开视频|日本欧美视频|国产成人短视频在线观看 | 久久不见久久见免费视频7|一级一级97片看一级毛片|奇迹少女第五季免费中文版|日韩字幕一中文在线综合|久久人精品|www.日韩精品.com | 欧美成人一二三|一区二区国产在线|欧美黑人激情性久久|欧美性大战久久久久久久蜜桃|亚洲色播爱爱爱爱爱爱爱|亚洲日本二区 | #NAME?|打开免费观看视频在线|中文字幕人妻熟女人妻|欧美精品国产|久久老司机|国产日批 | 中国一级毛片在线视频|99在线观看免费视频|亚洲九九热|www.精品国产|亚洲www久久久|欧美白浆视频 | 日本黄色一区|人成免费网站|中文字幕第八页|亚洲欧美变态另类综合|日日草天天干|亚洲福利中文字幕在线网址 | 久久久久无码国产精品一区乞丐|97一区二区三区|成人影院久久|九九九免费|俄罗斯18一19sex性大|国产精品一二三四区免费 | 国产高跟丝袜脚交视频|最短的距离是圆的高清在线观看|一区二区三区视频播放|国产精品黄页在线播放免费|#NAME?|精品国产乱码久久久久久中文 | 国精产品W灬源码1688伊在线|在线观看肉片=aV网站免费|黄色生活毛片|免费看=av网页|亚洲色欧美国产综合|国产青青操 | 国产高清在线看|奶头好大揉着好爽视频|www超碰|女人天堂=av在线|久久久久久久久久一级|99国产精品粉嫩初高生在线播放 | 亚洲国产精品一区在线观看不卡|久久精品视频免费在线观看|米奇777超碰欧美日韩亚洲|国产一区二区视频在线观看免费|玩弄美艳馊子高潮秀色可贪|日本做暖暖xo小视频 | 国产清纯女高中生被c|精品久久久久中文字国产|国产一级内谢|91精品综合|制服丝袜长腿无码专区第一页|亚洲欧洲一区二区 | 成人午夜久久|成人久久18免费网站麻豆|国产精品免费一区二区三区在线观看|男人天堂黄色|蜜臀二区|www亚洲免费 | 中国=av在线免费观看|麻豆色播|一级毛片视频在线|一级免费片|毛片在线免费视频|中国一级女人毛片 | 青青久草视频在线|波多野结衣中文字幕一区二区|美女天天操|日韩成人午夜视频|91中文字幕网|99久视频 | 国产极品粉嫩馒头一线天=av|日韩在线观看|国产第一毛片|少妇又紧又粗又硬又爽视频|欧美人与动zozo|#NAME? | 亚洲精品=a级九色|99在线啪|欧美中文视频|亚洲精品国产一区二区色欲影院|精品久久久久久亚洲精品|性欧美free德国极品 | 亚洲精品网站在线观看|国产精品美女久久福利网站|久久xxxx|亚洲精品精品|国产激情99|国产高清无码日韩一区 | 亚洲成人伦理|国产在线一|91超碰碰|小s=ao货水好多真紧h无码视频|久久亚洲精精品中文字幕|欧美日韩午夜精品 | 精品国产乱码久久久久久绯色|免费=av入口|色综合久久夜色精品国产=aV|国产青年男男GV|添逼视频|国产vr精品专区 | 国产一级黄色网|亚洲欧洲一区|国产91传媒|成人网站在线进入爽爽爽|亚洲精品7777xxxx青睐|亚洲在线资源 | 成人精品视频一区二区|综合精品久久|久久www视频|绿巨人www在线观看|免费看=a=a=a=a=a级少淫片|91tv在线播放网站 | 97porm国内自拍视频|午夜精品一区二区三区在线播放|久久免费手机视频|人妻体体内射精一区二区|一级片=a|日本亚洲中文在线 | 精品国产96亚洲一区二区三区|水蜜桃综合久久无码欧美|国产精品久久久久久久第一福利|成人无码免费视频在线观看网址|伊人wwwyiren22cn|极品尤物被啪到呻吟喷水 |