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質(zhì)譜常見問題及使用經(jīng)驗

來源:北京京科瑞達科技有限公司   2024年05月09日 11:25  

京科瑞達二手儀器供應(yīng)島津、安捷倫、賽默飛等品牌的二手氣質(zhì)聯(lián)用儀二手液質(zhì)聯(lián)用儀等。今天我們來詳細談?wù)勱P(guān)于質(zhì)譜常見問題及使用經(jīng)驗,希望能夠?qū)δ兴鶐椭?/p>

質(zhì)譜儀常見問題匯總

1、質(zhì)譜不出峰的可能原因?

答:

1)進樣系統(tǒng)與離子源沒連接或有漏液

2)六通閥漏液

3)霧化氣沒開

4)噴霧電壓沒有

5)離子進入分析器的離子通道堵塞

6)噴霧毛細管堵塞

2、如何根據(jù)樣品選擇離子源?

答:可根據(jù)分子量的大小、極性。APCI適合小分子,極性小的化合物;ESI適合分析的分子量范圍較大、分子要求帶有一定極性。一般先考慮用ESI分析,如果極性實在太小,才想到用APCI。

3、等度還是梯度洗脫如何選擇?

答:其實只做一兩個化合物,是等度洗脫好,速度快,但也并非越快越好,特別在分析生物樣品時,考慮到基質(zhì)效應(yīng),保留因子控制在2-3左右較好。梯度洗脫適合分析多個結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì),如化合物與代謝產(chǎn)物一同鑒定的時候,比如苷和苷元的一同測定。另外很多做合成化學(xué)的分析實驗室用的也是一通用的梯度洗脫方法,一個方法搞定大部分樣品。一般來說對于組成簡單的樣品可以采用等度洗脫,而對于那些復(fù)雜的樣品分離通常需要進行梯度洗脫。

4、氣質(zhì)和液質(zhì)系統(tǒng)對比

答:除了采用的分離手段不同(氣相和液相)外主要的區(qū)別在于真空系統(tǒng)和電離方式。氣質(zhì)的真空系統(tǒng)比較簡單,只要一個小的機械泵和一個分子渦輪泵就可以了。液質(zhì)的機械泵要比氣質(zhì)大,需要兩個分子渦輪泵。氣質(zhì)的電離方式有電子電離(EI)和化學(xué)電離(CI)。液質(zhì)的電離方式有電噴霧電離(ESI)、大氣壓化學(xué)電離(APCI)和大氣壓光電離(APPI)。

二手安捷倫氣質(zhì)聯(lián)用儀 7890A-5975C

二手安捷倫氣質(zhì)聯(lián)用儀 7890A-5975C

島津氣質(zhì) QP2010

二手島津氣質(zhì)聯(lián)用儀 QP2010

5、APCI和ESI的不同點?

答:

1)離子產(chǎn)生的方式不同。APCI利用電暈放電離子化,氣相離子化。ESI利用離子蒸發(fā),液相離子化。

2)能被分析的化合物類型不同。APCI適合弱極性,小分子化合物,且具有一定的揮發(fā)性;ESI 極性化合物和生物大分子。

3)流速不同。ESI一般流速較小,約0.001到0.25 mL/min,APCI 相對較大,約0.2到2 mL/min。

4)多電荷。APCI不能生成一系列多電荷離子,所以不適合分析大分子;ESI 能生成一系列多電荷離子,特別適用于蛋白,多肽類等生物分子。

6、CID和CAD區(qū)別?

答:CID(collision-induced dissociation),碰撞誘導(dǎo)解離。通常在真空接口處調(diào)節(jié)電壓發(fā)生CID現(xiàn)象,一般是去除溶劑,如果電壓增大,也會產(chǎn)生碎片離子。這是yi級質(zhì)譜的原理。CAD(collision-activated dissociation) 碰撞活化解離。 做二級質(zhì)譜時,選擇的母離子進入Q2后,碰撞活化產(chǎn)生子離子,這個過程稱為 CAD。以API3200譜儀為例,CID指的是Q0里面的誘導(dǎo)碰撞的氣體,CAD指的是Q3里面的誘導(dǎo)碰撞氣體。也就是說,在這里的CID&CAD都是指氮氣。

7、氮氣發(fā)生器該使用嗎?

答:氮氣發(fā)生器的工作原理是分離空氣,電解膜的負極側(cè)發(fā)生氧化反應(yīng),“吃掉”空氣中的氧化性氣體,在正極側(cè)還原,空氣流過電解池后就只剩下氮氣和惰性氣體。故國內(nèi)發(fā)生器的純度大多標(biāo)有“相對含氧量”。氮氣的純度和空氣流速、有效分解面的長度、電解電勢的強弱都有關(guān)系。這種分離方法也決定了氮氣的純度不可能做的很高。加入電解質(zhì)的作用就是提高水的導(dǎo)電率,使電化學(xué)反應(yīng)能順利進行。發(fā)生器對質(zhì)譜的影響有一點常常被忽略,就是發(fā)生器內(nèi)的開關(guān)電源工作時會對電網(wǎng)電壓造成一定的干擾(壓縮機的啟動和停止也會)。

8、串聯(lián)質(zhì)譜如何定量?

答:串聯(lián)質(zhì)譜定量時,是以后面產(chǎn)生的碎片峰(子離子)定量。但是這一子離子是由母離子在碰撞室產(chǎn)生的特征性碎片,所以用MRM定量靈敏度會比用SIM定量好很多。建立方法的步驟是:用一定溶度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(1-10 ug/mL)調(diào)諧化合物的yi級質(zhì)譜條件,找到母離子的質(zhì)譜條件。然后對母離子進行打碎,優(yōu)化碰撞能量,得到其特征性的子離子。zui后利用該質(zhì)譜條件和該母離子->子離子對進行定量。

9、質(zhì)量偏差怎么辦?

答:質(zhì)譜的質(zhì)量數(shù)偏了,說明你的儀器該校正了,一般3個月就要校一次機。一般每個廠家都會隨機帶有校正液。

10、如何更換機械泵油?

答:一般3個月到半年更換一次泵油,可同時停機對儀器進行一次清洗。更換泵油的時候,先開啟振氣閥5-10分鐘,待將泵內(nèi)沉淀振起后,關(guān)閉振氣閥,同時關(guān)閉電源。打開泵下的泵油排放閥門,放掉舊油。如果泵油已經(jīng)很臟,則可取少許新油清洗泵后放掉再注入新油。

二手AB液質(zhì)聯(lián)用儀 API4000 Q-Trap

二手LCMSMS AB4000 Q-Trap

二手島津液質(zhì)聯(lián)用儀 LCMS-2010EV

二手島津液質(zhì)聯(lián)用儀 LCMS-2010EV

二手賽默飛液質(zhì)聯(lián)用儀 TSQ Quantum Ultra

二手LCMSMS 賽默飛 TSQ Quantum Ultra

11、產(chǎn)生碰裝室離子交互影響(Collision Cell Cross Talk)的原因及消除?

答:多通道掃描(MRM)時,如果兩個離子掃描通道的碎片離子一樣(或類似如相差1-2分子量單位),前一個離子通道掃描結(jié)束后,碰裝室里的離子來不及清除,影響下一個離子通道反應(yīng)的定量(如果色譜分離則無此影響)。

可能的消除方法:

1)選擇特異的子離子(特別是在用穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)時)

2)增加離子通道掃描反應(yīng)之間的時間間隔(如100 ms→300 ms)

3)可設(shè)置額外的“無用的離子掃描通道(dummy MRM)”

12、排除色譜柱流失問題的方法是什么?

答:診斷色譜柱是否存在流失問題的方法是第yi次在方法條件下安裝色譜柱時,做一次空白色譜圖,然后將最近的運行和空白運行色譜圖對比。如果在空白運行中產(chǎn)生了很多峰,則色譜柱性能改變,這可能是由于載氣中含有氧氣,也可能是由于樣品殘留。如果有 GC-MS,則低極性色譜柱的典型流失離子(例如 DB/HP-1或5)質(zhì)/荷比m/z 將為 207、73、281、355 等,大多數(shù)為環(huán)硅氧烷。

13、譜圖為什么只有溶劑峰?

答:可能有以下原因

1)進樣針損壞

2)載氣流速太低

3)樣品濃度太低

4)樣品被柱或進樣器襯套吸附

14、質(zhì)譜基線高是什么原因?

答:質(zhì)譜的基線其實跟液相的紫外檢測器和熒光檢測器一樣,基線高的原因不外乎內(nèi)部和外部的原因。

1)選擇的流動相在質(zhì)譜的響應(yīng)比較高,比如水相比較多的時候,噪音比較大些;還有如果鹽含量比較大的時候,噪音更大些。

2)檢測器的靈敏度越高的時候,噪音應(yīng)該越高。如果質(zhì)譜的污染比較嚴重時,基線肯定比較高。比如離子阱檢測器,用得久了,阱中的離子就會增多,一方面降低了質(zhì)譜的靈敏度,另一方面增加了基線噪音。

3)質(zhì)譜的基線很多時候還跟你選擇的離子寬度有關(guān)。比如作選擇離子掃描的時候,基線就低些。作選擇反應(yīng)掃描的時候,離子寬度不要選得太寬,太寬噪音就高些。

4)多級質(zhì)譜一般做二級或三級質(zhì)譜,基線噪音就低很多。

質(zhì)譜相關(guān)的使用經(jīng)驗

1)不用直接進樣(容易污染離子源)。

2)做聯(lián)用時應(yīng)分流(縮短分析時間、延長質(zhì)量分析器壽命)。

3)應(yīng)使用在線切換閥,將每個樣品的前后1-2分鐘的流動相切入廢液(避免樣品中的鹽進入質(zhì)譜。做Sequence時可以把平衡柱子的流動相切入廢液)。

4)開始聯(lián)用前,直接運行質(zhì)譜數(shù)分鐘,可以先將溫度(毛細管溫度和離子源溫度(APCI))加熱到預(yù)設(shè)定值。

5)待機時將切換閥置于waste,避免剛開液相時將流動相打入離子源。

6)關(guān)機前毛細管的溫度先降下來,穩(wěn)定一段時間后再關(guān)閉電源,避免風(fēng)扇停止轉(zhuǎn)動后毛細管外圍的熱量向里擴散,容易引起內(nèi)部線路及電子元器件老化加速。

7)如果用的是鋼瓶而且天天做樣的話,可將兩個鋼瓶并聯(lián)。

8)做定量時注意離子源噴針的具體位置,否則可能會影響標(biāo)準(zhǔn)曲線。

9)如果是負離子檢測的話,可以向流動相中加入少量異丙醇。

10)理論上液質(zhì)聯(lián)用禁止使用任何不揮發(fā)性的緩沖鹽。如果需要,盡量使用諸如乙酸氨等揮發(fā)性鹽,濃度不要超過20mmol/L。對于不揮發(fā)性的緩沖鹽,如果你的儀器有吹掃捕集的話也可使用,但一定要小心。萬不得已也不要用,首先有不揮發(fā)鹽是得不到好的離子流的,其次鹽留在質(zhì)譜中很難除掉,除非停機清洗,不然一直會影響其他樣品的分析。可以找質(zhì)譜友好的條件來做液質(zhì)聯(lián)機,例如色譜條件為20mM磷酸鹽的水/乙腈流動相,做液質(zhì)聯(lián)機的時候就可以用醋酸銨代替,然后用醋酸調(diào)節(jié)pH值與磷酸鹽的一致即可。除了難揮發(fā)的鹽,三乙胺、表面活性劑、還有高濃度(>0.5%)的TFA,都對質(zhì)譜不好,液質(zhì)聯(lián)用的流動相中應(yīng)該避免。

11)需要使用酸的情況下可以用甲酸、乙酸,三可以用,但能用甲酸或乙酸時就別用TFA。

12)胺類物質(zhì)做ESI質(zhì)譜時要注意進樣量要少,因為很容易離子化,不易沖洗干凈,會影響后面樣品的測定。像三乙胺在液質(zhì)聯(lián)用時不能用于調(diào)節(jié)流動相pH值。若不慎引入三乙胺,在正離子檢測時總會出現(xiàn)很強的102峰。

13)酸性物質(zhì)適合做負離子檢測,所以流動相偏堿性較合適,促使其解離,堿性物質(zhì)適合做正離子檢測,流動相中適當(dāng)?shù)募尤胨幔偈蛊湫纬烧x子,流動相中適當(dāng)加一些醋酸鈉(或者醋酸銨),可形成加鈉的正離子或者加銨的正離子。

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