液相色譜儀測定氨基酸的含量
1  L--*含量的測定
1.1 實驗儀器與試劑
*樣品，甲醇， STI501液相色譜儀梯度系統，UV501紫外檢測器，7725I手動進樣閥，N2000色譜工作站，0.03%KH2PO4溶液
1.2 HPLC色譜分析條件
流動相為0.03%KH2PO4溶液（A）-甲醇（B），線性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱溫 35℃，檢測波長276nm。
流動相 時間（t/min）
 5 10 15 20
A（%） 80 90 80 70
B（%） 20 10 20 30
1.3 標準溶液的配制
精密稱取*標準標準品50mg，置100ml容量瓶中，振搖，用流動相溶解到刻度，作為供試品溶液，另取*樣品適量，同法操作。
1.4 標準直線的制作
精密稱取*標準樣品適量 ,分別稀釋制成每1ml 中含*50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色譜儀，以*峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標，制作回歸標準直線。
1.5 發酵液中樣品中*含量的測定
取發酵液，稀釋配制成約 500μg/ ml 的溶液，搖勻，過濾，取25μl進樣，在液相色譜儀下測量，記錄峰值面積，作圖。
2 L-*含量的測定
2.1 實驗儀器與試劑
L-*標準樣品，乙腈， STI501液相色譜儀梯度系統，UV501紫外檢測器，7725I手動進樣閥，N2000色譜工作站，磷酸二氫銨。
PH計，磷酸，
2.2 　HPLC色譜分析條件
流動相: 以磷酸二氫銨溶液 （ 稱取磷酸二氫銨1.15g, 加水800m溶解后, 用磷酸調節pH 值至2.0±0.1, 加水稀釋至 1000ml ） - 乙腈為流動相，線性梯度淋洗; 柱溫為30℃檢測波長為206nm；進樣量：25μl。
2.3 標準直線的制作
精密稱取*標準標準品50mg，置100ml 容量瓶中，振搖，用流動相溶解到刻度，作為供試品溶液，另取*樣品適量，同法操作。精密稱取*標準樣品適量 ,分別稀釋制成每1ml 中含*50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色譜儀，以*峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標，制作回歸標準直線。
2.4 發酵液中樣品中*含量的測定
取發酵液，稀釋配制成約 500μg/ ml 的溶液，搖勻，過濾，取25μl 進樣，在液相色譜儀下測量，記錄峰值面積，作圖。

3 L-*含量的測定
3.1 實驗儀器和試劑
    乙酸銨溶液；乙腈；L-*標準樣品； STI501液相色譜儀梯度系統，UV501紫外檢測器，7725I手動進樣閥，N2000色譜工作站。
3.2 ＨＰＬＣ色譜分析條件
流動相:A為0.02%mol/L乙酸銨溶液（PH=6.5）:B為乙腈，線性梯度淋洗；流速: 110 mL/min ；柱溫:30℃；進樣量:２0μL。
梯度洗脫表3
流動相 時間（t/min）
 10 20 30 40 50 60
A（%） 80 60 40 40 60 80
B（%） 20 40 60 60 40 20
3.3 標準直線的制作
方法同2.2節
3.4 發酵液中樣品中*含量的測定
     方法同2.5節

4 L-*含量的測定
4.1   實驗儀器和試劑
   L-*標準樣品；甲醇；醋酸鈉； STI501液相色譜儀梯度系統，UV501紫外檢測器，7725I手動進樣閥，N2000色譜工作站。
4.2   HPLC色譜分析條件
流動相: A為甲醇 , B為 50 mmol /L的醋酸鈉緩沖溶液;流速1 . 0 mL /min;梯度洗脫見表1，測定波長為 262 nm，柱溫為30℃。
梯度洗脫表4
流動相                 時間（t/min）
 10 20 30 40 50 60
A（%） 30 50 80 85 100 100
B（%） 70 50 20 15 0 0
4.3   標準直線的制作
方法同2.2節
4.4   發酵液中樣品中*含量的測定
     方法同2.5節
5 回收率實驗
　 稱取*標準液50μg/ml分別稀釋0、1、2、4、6、8、10倍，每份取1ml，按標準樣品處理方法，過濾，測定標準樣品中的*的含量，計算回收率。

賽智科技（杭州）有限公司，想客戶所想，免費為客戶提供產品檢測方案和技術咨詢。詳細可登陸或者咨詢.