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高效液相色譜柱問題大全和解決辦法

來源:成都摩爾科學儀器有限公司   2022年08月19日 09:10  

 1.液相色譜柱柱壓問題柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方,柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。

 

  1.1壓力過高:

 

  這是高效液相色譜在使用中***常見的問題,指的是壓力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時,我們應該分段進行檢查。

 

  (1)首先斷開真空泵的入口處,此時,PEEK管里充滿液體,使PEEK管低于溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果,液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過濾頭堵塞。

 

  處理方法:

 

  用30%的硝酸浸泡半個小時,在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,溶劑過濾頭正常,再檢查;

 

  (2)打開Purge閥,使流動相不經(jīng)過柱子,如果壓力沒有明顯下降,則是過濾白頭堵塞。

 

  處理方法:

 

  將過濾白頭取出,用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI(6.7Bar)以下,過濾白頭正常,再檢查;

 

  (3)把液相色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。

 

  處理方法:

 

  如果是緩沖鹽堵塞,則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導致堵塞,則要用比現(xiàn)在流動相更強的流動相沖至壓力正常。

 

  假如,按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上,用流動相沖洗液相色譜柱。這時,如果色譜柱柱壓仍不下降,只有換色譜柱柱子入口篩板,但是,一旦操作不甚,很容易造成色譜柱柱效下降,所以,盡量少用。

 

  1.2壓力過低

 

  壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏

 

  處理方法:

 

  尋找各個接口處,特別是色譜柱兩端的接口,把泄漏的地方旋緊即可。當然,還有一個原因***是泵里進了空氣,但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn),忽高忽低,更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。

 

  處理方法:

 

  打開Purge閥,用3~5mL/min的流速沖洗,如果不行,則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

 

  2.漂移問題主要包括基線漂移和保留時間漂移。

 

  2.1液相色譜基線漂移

 

  一般說來,液相色譜儀剛起動時,基線容易漂移,大概要半個小時的平衡時間,如果,你用了緩沖溶液或緩沖鹽,還有***是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長,但是,如果你在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移,則你要考慮下面的原因:

 

  ①紫外燈能量不足。

 

  解決方法:

 

  更換新的紫外燈;

 

  ②柱溫波動。

 

  解決方法:

 

  控制好柱子和流動相的溫度,檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。

 

  ③流通池被污染或有氣體。

 

  解決方法:

 

  用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(******斷開柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。

 

  ④流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。

 

  解決方法:

 

  檢查流動相的組成,使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑。

 

  ⑤樣品中有強保留的物質(zhì)(高K'值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而,表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。

 

  解決方法:

 

  使用保護柱,如有必要,在進樣之間。在分析過程中,定期用強溶劑沖洗柱子。

 

  ⑥檢測器沒有設定在******吸收波長處。

 

  解決方法:

 

  將波長調(diào)整至******吸收波長處;

 

  ⑦流動相的pH值沒有調(diào)節(jié)好。

 

  解決方法:

 

  加適量的酸或堿調(diào)至******pH值;

 

  2.2保留時間漂移

 

  保留時間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個重要標志,同一種東西,兩次的保留時間相差不要超過15s,超過了半分鐘可看做保留時間漂移,***無法進行定性,你要考慮以下原因:

 

  ①溫控不當。

 

  解決方法:

 

  調(diào)好柱溫,檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。

 

  ②流動相比例變化。

 

  解決方法:

 

  檢查四元泵的比例閥是否有故障。

 

  ③色譜柱沒有平衡。

 

  解決方法:

 

  在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。

 

  ④流速變化。

 

  解決方法:

 

  重新設定流速。

 

  ⑤泵中有氣泡。

 

  解決方法:

 

  從泵中除去氣泡。

 

  2.3峰型異常問題

 

  峰型問題是液相的主要問題,在做液相過程中,我們***是要變換不同的條件來改善不好的峰型,對于各種各樣的異常峰,要區(qū)別對待,從主要問題出發(fā),一個一個加以解決。

 

  ①所有峰均為寬峰。

 

  解決方法:

 

  系統(tǒng)未達到平衡;

 

  溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多;

 

  色譜柱尺寸及類型選擇不正確;

 

  色譜柱或保護柱被污染或柱效降低;

 

  溫度變化造成的影響。

 

  ②所出峰比預想的小。

 

  解決方法:

 

  樣品黏度過大;進樣品故障或進樣體積誤差;檢測器設置不正確,定量環(huán)體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現(xiàn)問題。

 

  ③色譜圖中未出峰。

 

  解決方法:

 

  系統(tǒng)未進樣或樣品分解;

 

  泵未輸液或流動相使用不正確;

 

  檢測器設置不正確;

 

  針對以上情況成因作相應調(diào)整即可。

 

  ④一個峰或幾個峰是負峰。

 

  解決方法:

 

  流動相吸收本底高;進樣過程中進入空氣;樣品組分的吸收低于流動相。

 

  ⑤所有峰均為負峰。

 

  解決方法:

 

  信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒;

 

  光學裝置尚未達到平衡。

 

  ⑥出現(xiàn)雙峰或肩峰。

 

  解決方法:

 

  進樣量過大;樣品濃度過高;

 

  保護柱或色譜柱柱頭堵塞;

 

  保護拄或色譜柱污染或失效;

 

  柱塌陷或形成短通道。

 

  ⑦前伸峰。

 

  解決方法:

 

  進樣量或樣品濃度高;

 

  溶解樣品的溶劑較流動。

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