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液相色譜柱的使用與維護

來源:杭州旭昱科技有限公司   2022年06月09日 09:32  
  
  液相色譜柱的使用與維護
 
  液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發展起來的分離分析技術,是現代分離測定的重要手段。問世以來,因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩定生理活性物質的特點而被廣泛應用于生物化學、藥物及臨床分析。液相色譜是用高壓將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑,緩沖液等活動相泵進裝有固定相的色譜柱,經進樣閥注進待測樣品,由活動相帶進柱內,在柱內各成分被分離后依次進進檢測器,色譜信號由記錄儀、積分儀或色譜工作站記錄。
 
  色譜柱是液相色譜的心臟,在液相色譜儀的使用中,保持色譜柱的柱效、容量和滲透粉性,延長柱子的使用壽命非常重要。因此對液相色譜柱的維護是關鍵。
 
  1 色譜柱的構造
 
  色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環)、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70㎏/㎝2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內壁要求有很高的光潔度。為進步柱效,減小管壁效應,不銹鋼柱內壁多經過拋光。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細管柱。色譜柱兩真個柱接頭內裝有篩板,是燒結不銹鋼或欽合金,孔徑0.2-20 μm(5-10μm),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。
 
  色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類,尺寸規格也不同:
 
  (I)常規分析柱(常量柱),內徑2-5mm(常用4.6mm,國內有4mm和5mm ),柱長10-30cm ;
 
  (2)窄徑柱,又稱細管徑柱、半微柱,內徑1 -2mm ,柱長10-20cm;
 
  (3)毛細管柱(又稱微柱),內徑0.2-0.5mm;
 
  (4)半制備柱,內徑>5mm;
 
  (5)實驗室制備柱,內徑20-40rnm,柱長10-30cm;
 
  (6)生產制備柱內徑可達幾十厘米。柱內徑一般是根據柱長、填料粒徑和折合流速來確定,目的是為了避免管壁效應。
 
  2色譜柱的使用和維護
 
  在日常分離分析工作中,色譜柱的正確使用和維護十分重要,色譜柱使用是否得當,直接影響色譜柱的壽命,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操縱過程中,需要留意下列題目,以維護色譜柱。
 
  (1)柱子在裝卸、更換時,動作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動,以免柱床產生空隙。
 
  (2)假如儀器用來做常規分析,樣品種類有限,但分析次數多,則不妨為每一類常規分析配置一根柱,這樣有助于延長柱子的壽命。
 
  (3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的忽然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的忽然升高或降低也會沖動柱內填料,因此在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩。
 
  (4)應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。
 
  (5)如使用柱溫控制裝置時,應留意在通人活動相后才能升溫。
 
  (6)一般說來色譜柱不能反沖,只有生產者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除往留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
 
  (7)選擇使用適宜的活動相,以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一個預柱,分析柱是鍵合硅膠時,預柱為硅膠,可使活動相在進進分析柱之前預先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
 
  8)避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內,需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。
 
  (9)經常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保存在柱內的雜質。在進行清洗時,對流路系統中活動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種活動相的體積應是柱體積的20倍左右,即常規分析需要50-75mL。
 
  (10)保存色譜柱時應將柱內布滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發干燥。盡對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。
 
  (11)色譜柱使用過程中,假如壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進人柱內,使柱頭被污染;假如柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。
 
 
 

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