液相色譜柱的使用

來源：杭州旭昱科技有限公司 2022年06月09日 08:56

　　液相色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要留意：液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

　　1、樣品的前處理：

　　a、使用活動相溶解樣品。

　　b、使用予處理柱除往樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

　　c、使用0.45μm的過濾膜過濾除往微粒雜質(zhì)。

　　2、活動相的配制：

　　液相色譜是樣品組分在柱填料與活動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求活動相具備以下的特點(diǎn)：

　　a、活動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時(shí)間保存在柱中)。

　　b、活動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

　　c、活動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用進(jìn)步溫度的方法降低活動相的黏度)。

　　d、活動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

　　e、活動相沸點(diǎn)不要太低，否則輕易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。

　　f、在活動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除往溶解在活動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止活動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

　　3、活動相流速的選擇：

　　因柱效是柱中活動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。

　　當(dāng)選用*流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長。可采用改變活動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

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