超微量核酸蛋白測定儀的比色法
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關于超微量核酸蛋白測定儀的比色法：
BCA、Lowry、Bradford都是通過比色來檢測非純蛋白的濃度的方法。比色法檢測蛋白濃度時必須構建一個標準曲線，因此將這三種測量蛋白的方法集合在比色法中。
BCA是一種通過比色來檢測非純蛋白的濃度的方法，它通常用于稀釋的蛋白濃度檢測以及那些含有在紫外區(qū)域有光吸收的雜質的蛋白的濃度檢測。BCA法是檢測Cu+1離子的方法，在堿性環(huán)境下，Cu＋2離子會被蛋白還原為Cu+1離子。兩個聯(lián)喹啉二羧酸BCA分子和一個 Cu+1離子形成紫色的螯合物這樣在有蛋白存在情況下，Cu-BCA形成的螯合物在562nm出有光吸收，以750nm光系數(shù)為標準化。
商業(yè)化的BCA試劑盒有兩種蛋白檢測范圍：
常規(guī)檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為20:1，這個試劑盒檢測范圍從0.20mg/到8.0mg/ml（BSA）。當使用基座檢測時，推薦使用4ul 樣品和80ulBCA試劑。
微量檢測使用1：1試劑/樣品，可以檢測蛋白濃度范圍從0.01mg/ml至0.20mg/m要準備足夠的樣品來做基座檢測，建議使用10ul樣品和10ulBCA試劑（使用P管）。
按照試劑盒廠家建議的操作來構建標準曲線和樣品準備。確保在所有檢測過程使用相同的時間和溫度。
    注意：如果試驗溫度高于60度，使用2倍的試驗體積，避免揮發(fā)導致樣品減少，從而影響測試結果。
Lowry法蛋白定量是一個應用非常廣泛的蛋白定量方法。Lowry法是蛋白與硫酸銅在堿性環(huán)境下反應形成銅-蛋白復合物。Folin－Ciocalteu試劑可以有效的還原銅復合物，產生與蛋白量成比例的藍色產物，可以在650nm檢測，405nm處校準。試驗中使用的試劑可以從多個廠家購買。
要準確準備標準品，推薦使用20ul的蛋白樣品和100ul的Lowry試劑來做反應。在本儀器上可以檢測的樣品濃度范圍是從0.20mg/ml到4mg/ml。按照試劑盒生產廠家的說明來準備標準品和樣品。在所有操作過程中要保持每個樣品處理時間和環(huán)境溫度一致。由于本儀器基座檢測的濃度范圍比常規(guī)檢測更大，在構建標準曲線時需要構建比廠家建議更寬的標準曲線范圍。檢測需要的樣品量推薦使用2ul。
Bradford是常用的蛋白定量的方法。它通常用于濃度比較低的蛋白的濃度檢測。Bradford法是根據(jù)蛋白能夠使考馬斯亮藍嘗試吸收位移來檢測蛋白濃度的，一般在595nm處檢測吸光度。蛋白-染料復合物在595nm處檢測并在750nm處做標準化。可以從多個廠家購買相應的試劑盒。
商業(yè)化的 Bradford 試劑盒有兩種蛋白檢測范圍：
常規(guī)檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為50:1，這個試劑盒檢測范圍從0.10mg/ml到8.0mg/ml（BSA）。線形范圍在0.01-1mg/ml。當使用基座檢測時，推薦使用4ul 樣品和200ul Bradford 試劑。
微量檢測使用1：1 試劑/樣品，可以檢測蛋白濃度范圍從15ug/ml 至125ug/ml。要準備足夠的樣品來做基座檢測，建議使用10ul 樣品和10ulBCA 試劑（使用PCR管）。按照試劑盒廠家建議的操作來構建標準曲線和樣品準備。確保在所有檢測過程中使用相同的時間和溫度。
    注意：如果試驗溫度高于60度，使用2倍的試驗體積，避免揮發(fā)導致樣品減少，從而影響測試結果。    
在Bradford試劑盒中同樣包括用于構建標準曲線的標準品。由于本儀器能夠檢測比常規(guī)比色皿檢測更高的濃度，用戶需要使用比廠家推薦的標準品更高的濃度。
5.2 比色法檢測
注意：比色法檢測進行樣品檢測前，需要建立標準曲線！
超微量核酸蛋白測定儀維護保養(yǎng)秘訣
超微量核酸蛋白測定儀是精密光學儀器，出廠前經過精細的裝配和調試，如果能對儀器進行恰當?shù)木S護和保養(yǎng)，不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性，也可以延長儀器使用壽命。
超微量核酸蛋白測定儀常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經過上述系數(shù)的換算，從而得出相應的樣品濃度。
 
超微量核酸蛋白測定儀的工作原理是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器，常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。無論在物理學、化學、生物學、醫(yī)學、材料學、環(huán)境科學等科學研究領域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產與管理部門 ,紫外可見核酸蛋白測定儀督有廣泛而重要的應用。
 
超微量核酸蛋白測定儀是精密光學儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。下面分享一些超微量核酸蛋白測定儀不可不知的保養(yǎng)常識。
(1)儀器工作環(huán)境的要求
超微量核酸蛋白測定儀對工作環(huán)境的要求如下。
①儀器應安放在干燥的房間內，使用溫度為5～35℃．相對濕度不超過85％。
②儀器應放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，且避免強烈的振動或持續(xù)的振動。
③室內照明不宜太強，且應避免直射日光的照射。
④電扇不宜直接向儀器吹風，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
⑤盡量遠離高強度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設備。
⑥供給儀器的電源電壓為AC 220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器，以加強儀器的抗干擾性能。
⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場所使用。
 
(2)儀器的日常維護和保養(yǎng)
①光源。光源的壽命有限，為了延長光源使用壽命，在不使用儀器時不要開光源燈，應盡量減少開關次數(shù)。在短時問的工作間隔內可以不關燈。剛關閉的光源燈不能立即重新開啟。
儀器連續(xù)使用時間不應超過3h。若需長時間使用，間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應及時更換新燈。更換后要調節(jié)好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附。若不小心接觸過，要用無水乙醇擦拭。
②單色器。單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內，不能拆開。選擇波長應平衡地轉動，不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應立即更換。
③吸收池。必須正確使用吸收池，應特別注意保護吸收池的兩個光學面。
④檢測器。光電轉換元件不能長時間曝光，且應避免強光照射或受潮積塵。
⑤當儀器停止工作時，必須切斷電源。
⑥為了避免儀器積灰和沾污，在停止工作時，應蓋上防塵罩。
⑦儀器若暫時不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關于超微量核酸蛋白測定儀的比色法。
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