噻呋酰胺又叫噻氟菌胺(thifluzamide),屬于噻唑酰胺類殺菌劑,具有強(qiáng)內(nèi)吸傳導(dǎo)性和長持效性?它是含噻唑環(huán)的苯基酰胺化合物,可防治多種作物病害,廣泛應(yīng)用于水稻?麥類?花生?棉花?甜菜?咖啡?馬鈴薯?草坪等多種作物m?目前尚不能査詢到噻呋酰胺在花生作物中的殘留*(maximumresiduelimit,MRL)值,我國GB2763-2016規(guī)定噻呋酰胺在稻谷中的MRL值為7mg/kg,在糙米中的MRL值為3mg/kg,馬鈴薯為2mg/kg,日本肯定列表規(guī)定噻呋酰胺在糙米中的MRL值為1mg/kg,馬鈴薯為0.05mg/kg?膳食風(fēng)險評估時,花生及花生油均歸類為植物油進(jìn)行評估,日膳食量按0.0327kg計算?目前國內(nèi)外關(guān)于噻呋酰胺的檢測方法多種多樣,使用較多的是氣相色譜法和髙效液相色譜法其檢測方法容易受到雜質(zhì)干擾,選擇性差,近年來,靈敏度高?選擇性強(qiáng)的高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)被用于噻呋酰胺的殘留檢測,但其檢測方式多是以負(fù)離子掃描模式為主,在實際的農(nóng)殘分析時存在一定的局限性,靈敏度通常不如正離子掃描模式髙?本研究經(jīng)過對前處理過程和儀器的調(diào)節(jié)優(yōu)化,建立了在電噴霧正離子模式下,采用超髙效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(ultraperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometer,UPLC-MS/MS)多反應(yīng)監(jiān)測(multiplereactionmonitoring,MRM)模式,檢測噻咲酰胺在花生中的殘留的分析方法?樣品經(jīng)乙腈提取,QuEChERS方法凈化,采用基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量測定,以期為膳食風(fēng)險評估工作打下基礎(chǔ)?

WatersHclass超高效液相色譜(美國Waters公司);UPLC/XevoTQ-S三重四極桿質(zhì)譜儀(配電噴霧離子源,美國Waters公司);CK2000高通量組織研磨儀(托摩根生物科技有限公司);Laborota4000eficient旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國Heidolph公司);Milli-Q超純水儀(美國Millipore公司);QL-901旋渦混合器(江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司)?乙腈(分析純,天津市康科德科技有限公司);乙腈?甲酸(色譜純,美國Fisher公司);無水*(MgS04,天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司);N-丙基乙二胺(primarysecondaryamine,PSA)?石墨炭黑(graphitecarbonblack,GCB)(上海安譜公司)?240g/L噻呋酰胺懸浮劑和噻呋酰胺農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品(純度&96.0%,合肥星宇化學(xué)有限責(zé)任公司)?分別稱取標(biāo)準(zhǔn)品各5.00mg于50mL棕色容量瓶中,用乙腈溶解并定容至刻度,配制成濃度為100Hg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液,于4°C條件下保存?分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液各0.5mL于50mL容量瓶,用乙腈定容至刻度,制成濃度為1jxg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液?

240g/L噻呋酰胺懸浮劑,設(shè)2個施藥劑量:低劑量為150ga.i./ha,高劑量為225ga.i./ha?各設(shè)1次?2次施藥,施藥間隔期7d,每處理設(shè)3次重復(fù)?用隨機(jī)法采集距末次施藥后14?21?28d的花生植株?土壤?花生殼和花生仁樣品?另設(shè)清水空白對照,處理間設(shè)保護(hù)隔離帶?

準(zhǔn)確稱取樣品(土壤?植株?花生仁?花生殼)5.0g于50mL具塞離心管中,加入20mL乙腈,5mL水,浸泡10min,用組織研磨儀振蕩提取15min后,向其中加人3g氣化鈉,再振蕩提取丨5min,于離心機(jī)上以4000r/min離心5min,量取10mL上清液,濃縮至干,用乙腈定容至2.5mL,待凈化?2.3.2凈化將待凈化液轉(zhuǎn)移至10mL離心管(預(yù)先加人200mg無水MgS04?70mgPSA和15mgGCB)中,渦旋振蕩2min,4000r/min離心5min,取上清液過0.22nm濾膜于2mL進(jìn)樣小瓶,待測?

相色譜條件feift:AcquityUPLCHSST3(100mmx2.1mm,1.8nm);流動相:A相:乙腈;B相:0.1%甲酸水溶液,乙腈+0.1%甲?7jC(90:10,F:F);進(jìn)樣量??1nL;柱溫■_30?<2;流速:0.2mL/min;運行時間:3min?

電離模式:電噴霧正離子ESI(+);毛細(xì)管電壓:1.5kV;離子源溫度:150°C;脫溶劑氣溫度:500°C;脫溶劑氣流量:1000L/h;錐孔反吹氣流量:150L/h;錐孔反吹壓力:7bar;檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式(multiplereactionmonitoring,MRM);質(zhì)譜采集參數(shù)見表1

2.6膳食暴露風(fēng)險評估

啤?呋酰胺在花生中的膳食暴露風(fēng)險評估分別由公式(1)?(2)計算得出?國家估算每日攝人量(nationalestimatesofdailyintake,NEDI):NEDl(mg>=2(STMRixEixPixFi)((riskquotient,RQ):RQ=NEDl/(ADI><bw)(2)式中:Fi=0.0327,為我國一般人群對花生的日攝入量,kg;STMRi為規(guī)范殘留試驗中值,mg/kg;Ei和Pi分別為食品的4ft部分因子和食品加丨:因子,本文中不考慮區(qū)別,均設(shè)1;ADI為每II允許攝人M,引用我閩閩家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定,mg/kgbw;bw為體重,kg,我國人均體S—般按63kg汁?RQ>1時,表示存在不可接受的風(fēng)險,數(shù)值越大,風(fēng)險越大;RQ<I時,表示風(fēng)險為可接受,數(shù)值越小,風(fēng)險越小

芩慮到嗯呋酰胺在乙腈溶液中有較強(qiáng)的溶解性和其在pH值為5￣9時穩(wěn)定,試驗嘗試了乙腈-甲酸水溶液流動相體系的多種配比關(guān)系,以調(diào)節(jié)目標(biāo)物峰形?最終發(fā)現(xiàn),在流動相屮加人少量甲酸,甲酸的濃度以0.1%為宜,且當(dāng)流動相流速為0.20mL/min,流動相配比為乙腈+0.1%甲酸水(90:10,時,冃標(biāo)化合物的出峰時間和峰形均能達(dá)到理想效果試驗對比了氣相色譜電子捕獲檢測器(H-ECD)和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(UPLC/MS/MS)對試驗樣品的影響?結(jié)果發(fā)現(xiàn),檢測器的選擇對花生仁樣品的檢測效果有較大的影響?由圖1￣2可以看出,在同一添加濃度,同一前處理條件[氣相檢測時,用正己烷+丙酮(95:5,K:F)定容]下,用氣相色譜電子捕獲檢測器分析,目標(biāo)物附近有很大的雜質(zhì)干擾,即使通過冷藏分離過濾,分析效果依然較差,而當(dāng)使用UPLC/MS/MS,檢測器的*選擇性能直接去除基質(zhì)干擾,而且目標(biāo)物峰形尖銳?對稱?因而本實驗選擇用UPLC/MS/MS作為最終檢測手段?

試驗根據(jù)噻呋酰胺理化性質(zhì)及樣品基質(zhì)特點,采用乙腈提取,QuECHERS方法凈化,超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定,建立了噻呋酰胺在花生樣品中簡便?快速?高靈敏度的電噴霧正離子檢測方法?噻呋酰胺在花生中各基質(zhì)樣品3個添加濃度水平下的回收率在75.5%和107.9%之間,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于1〇%?膳食風(fēng)險評估結(jié)果表明,240g/L噻呋酰胺懸浮劑,150￣225ga.i/ha在花生上用藥1?欠,采收間隔期14?21?28d,風(fēng)險商為0.0013,使用安全?該方法測定結(jié)果重現(xiàn)性好,準(zhǔn)確度?靈敏度和精密度均符合農(nóng)藥殘留分析要求,可用于花生各基質(zhì)樣品中噻呋酰胺殘留t的測定,亦可為其他樣品中噻呋酰胺殘留A的測定提供參考?