支氣管哮喘是一種氣道慢性炎癥性疾病，Th2 細(xì) 胞在誘導(dǎo)和維持免疫炎癥過(guò)程中起重要的作用。 Th2 細(xì)胞 主 要 分 泌 白 細(xì) 胞 介 素-8 （IL-8）、腫 瘤 壞 死 因 子-α（TNF -α）等 促 進(jìn) IgE 的 合 成 、嗜 酸 性 粒 細(xì) 胞 （EOS）的生 長(zhǎng) 與 分 化，以 及 黏 液 分 泌 、氣 道 高 反 應(yīng) （AHR）的發(fā)生。 氣道平滑肌細(xì)胞（ASMCs）具有收縮功 能及分泌功能，能分泌趨化因子、細(xì)胞因子等多種炎 性介質(zhì)，對(duì)氣道炎癥的發(fā)生及發(fā)展起著重要的作用。研 究表明，與哮喘發(fā)生有關(guān)的 Th2 型細(xì)胞因子 IL-8 及趨化因子 TNF-α 等在 ASMCs 上均有表達(dá)，它們?cè)趨⑴c氣道炎癥的發(fā)生、EOS 的生長(zhǎng)與分化以及 AHR 的發(fā)生過(guò)程中均起重要作用。

*注射液（蘇州長(zhǎng)征-欣凱制藥有限公司， 生產(chǎn)批號(hào)：121128）；*磷酸鈉注射液（辰欣藥 業(yè)股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：1210206432）；雞卵白蛋 白（OVA）（Ⅱ、Ⅴ級(jí)）（上海研生生化試劑有限公司）； DAB 顯色試劑盒[生工生物工程（上海）有限分公司]； 多聚賴氨酸（北京格瑞納健峰生物技術(shù)有限公司）；大 鼠 IL -8、TNF -α 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 測(cè) 定 （ELISA） 試 劑 盒（美 國(guó) R&D 公司）；402Ai （上 海 魚 躍 醫(yī) 療 設(shè) 備 有 限 公 司）；FA1004 型微量電子天平 （精 度：0.1 mg， 上海賽德利思精密儀器儀表有限公司）； QL-902 漩渦混懸器 （海門市其林貝爾儀器制造有限 公司）；AXTGL16M 高速低溫離心機(jī) （上海趙迪實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備有限公司）；普通光學(xué)顯微鏡（ 蘇州耀宏光電科技有限公司 ） ；Qwin550w 型計(jì)算機(jī)病理圖 像分析系統(tǒng)（德國(guó) LeicaQwin公司）。

6～8 周齡 的 BALB/c 小鼠 共 32 只 ，雌性 ，體 重 20～25 g，購(gòu)自濰坊醫(yī)學(xué)院（以下簡(jiǎn)稱“我校”）實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物中心。清潔喂養(yǎng)，環(huán)境溫度控制在 22～25℃，環(huán)境濕度 控制在 40%～70%，進(jìn)水不限，喂養(yǎng)食物中不含 OVA。本研究經(jīng)我校動(dòng)物試驗(yàn)倫理委員會(huì)審核并予以批準(zhǔn)。

32 只小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為四組：A 組，生 理鹽水對(duì)照組；B 組，哮喘組；C 組，*干預(yù)組； D 組，*干預(yù)組。每組 8 只小鼠。清潔級(jí)復(fù)制哮 喘模型：分別于第 0、7、14 天，予 B、C、D 組小鼠腹 腔注 射 OVA 25 μg+Al（OH）3 1 mg。 致敏 1 周后 第 21～26 天， 將小鼠置于透明玻璃容器中，2% OVA 生 理鹽水溶液霧化吸入。A 組予等量生理鹽水代替 OVA 致敏和激發(fā)。各組小鼠均每天激發(fā) 1 次，30 min/次，激 發(fā) 6 d。 B 組激發(fā)后未予任何藥物干預(yù)。 C 組于第 14天 起，霧化吸入 1 h 后皮下注射* 0.4 mg/mL，連 續(xù) 7 d。 D 組于第 14 天起，霧化吸入 1 h 后皮下注射 *磷酸鈉 2 mg/kg，連續(xù) 7 d。

激發(fā)后 24 h （第 27 天），處 死 小 鼠，打 開 小 鼠 胸 腔 取 右 肺 組 織， 10%中性甲醛固定，脫水、包埋，制作蠟塊，病理切片， 進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，100×光鏡下觀察肺組織 結(jié)構(gòu)。

激發(fā) 后 24 h（第 27 天），各組小鼠 用 37℃生理鹽 水 1 mL 進(jìn)行肺灌洗，反復(fù) 3 次，收集左肺支氣管肺泡灌洗液 （BALF），采用 ELISA 法檢測(cè) IL-8、TNF-α、嗜酸性粒 細(xì)胞計(jì)數(shù)及白細(xì)胞計(jì)數(shù)。 試驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō) 明書進(jìn)行。

采用 SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量 資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因 素方差分析，兩兩比較采用 LSD-t 檢驗(yàn)，以 P ＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

B 組小 鼠 于 霧 化 激 發(fā) 時(shí) 出 現(xiàn) 煩 躁 不 安、抓 耳 撓 腮、呼吸急促、打噴嚏、流涎、大小便失禁、腹肌強(qiáng)直等 哮喘反應(yīng)；而 C 組及 D 組霧化激發(fā)時(shí)上述反應(yīng)均減輕； A 組幾乎無(wú)任何反應(yīng)。

A 組小鼠氣道黏膜無(wú)增厚，氣道周圍無(wú)炎癥細(xì)胞 浸潤(rùn)，肺泡壁結(jié)構(gòu)完整；B 組小鼠氣道黏膜充血水腫， 氣道周圍較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡結(jié)構(gòu)被破壞；C 組 小鼠氣道周圍少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，管壁無(wú)明顯增厚； D 組小鼠程度與 C 組小鼠相似。 見圖 1（封四）。2.3 各組小鼠 BALF 中白細(xì)胞總數(shù)和 EOS 百分比的 比較 與 A 組比 較，B 組小 鼠 BALF 中白 細(xì) 胞 總 數(shù) 和 EOS 百分比均顯著升高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.01）。 與 B 組比較，C 組和 D 組小鼠 BALF 中白細(xì)胞 總數(shù)及 EOS 百分比明顯降低，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義（P ＜ 0.01）。C、D 兩組白細(xì)胞總數(shù)和 EOS 百分比比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05）。 見表 1。

3 討論

既往研究發(fā)現(xiàn)，在慢性哮喘患者和動(dòng)物模型中均 存在氣道上皮脫落、氣管周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、AHR 等 改變。 炎性細(xì)胞因子（如 IL-8、TNF-α﹚是目前用于 判斷氣道炎癥的主要指標(biāo)。 氣道炎癥被認(rèn)為是哮喘的 本質(zhì)，T 細(xì)胞在控制氣道炎性反應(yīng)中起重要作用，Th1/ Th2 細(xì)胞比例失衡，Th2 型細(xì)胞因子分泌增多在氣道 炎癥的形成中發(fā)揮重要作用。 本研究發(fā)現(xiàn)：哮喘 組小鼠支氣管肺泡灌洗液中 IL-8 和 TNF-α 濃度均 較正常對(duì)照組明顯降低。 與既往研究結(jié)果相符。綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)*可以抑制 IL-8、 TNF-α 的表達(dá)，阻礙 Th2 型細(xì)胞因子的生成，緩解氣 道炎癥。