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其林貝爾混合器對于樺褐孔菌多糖的優化提取的

來源:上海蟻霖科學儀器有限公司   2021年11月08日 18:59  

樺褐孔菌(Phaeoporus obliquus J. Schroet),是一 種生長在寒帶的木腐菌,主要分布于北緯 45°~50° 地區,包括北歐、俄羅斯、日本及中國黑龍江和吉林等地區。 其化學成分包括多糖類化合物、芳香物質、 多酚類化合物、三萜類化合物等 。 從 16 世紀以 來,樺褐孔菌作為民間藥物,在預防和治療癌癥、心臟病、肝病、降血糖、胃病等疾病方面功效*且無 明顯的毒副作用 ,但尚未見樺褐孔菌皂苷對非酒 精性脂肪肝病的研究報道。



1 材料與方法

1.1 試劑與儀器


樺褐孔菌購于黑龍江省綏芬河市;TG、TC、 LDL、HDL、ALT 試劑盒購于上海源葉生物科有限公司;石蠟、乙醇購于北京化工廠;中性樹膠購 自上海凱博生物有限公司;HE 染色液購自Solarbio 公司。 CX31 型電子顯微成像系統 (Olympus 公司); MT-360 型*混合器 (江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司);BT25S 型電子天平 (德國賽多利斯集團);R20 型旋轉蒸發儀(BUCHI Switzerland 公司)。



1.2 樺褐孔菌多糖測定

將樺褐孔菌粉末過篩, 準確稱取 5 g 粉末溶于 30%的乙醇溶液中,分別改變提取條件為提取溫度、 提取時間、料液比以及超聲功率,用 80%的乙醇溶 液沉淀多糖后,4 000 r / min 離心 7 min 后取上清液, 減壓濃縮至浸膏后水浴至干,得粗制多糖,通過標準 曲線的方法測定含量。



1.3 正交試驗

在單因素試驗基礎上, 以樺褐孔菌多糖提取率 為考察指標,進行 L9(34 )正交試驗,各因素與水平見表 1。



1.4 小鼠造模


將 40 只雄性昆明小鼠適應性飼養 7 d 后隨機 分為正常組、模型組和藥物低、高劑量組,每組 10 只,除正常組給予普通飼料外,其余各組均給予高糖 高脂飼料造模,每天定點對小鼠進行灌胃,正常組和 模型組小鼠灌胃等量的生理鹽水, 低劑量給藥組給 予 60 mg / kg 樺褐孔菌多糖進行灌胃,高劑量給藥組給予 120 mg / kg 樺褐孔菌多糖進行灌胃, 連續灌胃 給藥處理 8 周。



2 結果與分析

通過對比分析分別改變提取時間、超聲功率、提 取溫度、 料液比條件下樺褐孔菌多糖類物質的提取 率。 結果表明,提取時間 30 min、超聲功率 40%,提 取溫度 40 ℃、 料液比 1∶15 時樺褐孔菌中的多糖提 取量。 通過正交試驗確定樺褐孔菌多糖的 提取工藝。正交試驗結果表明,影響樺褐孔菌多糖類 物質提取量的因素主次順序為 B>A>D>C,超聲功率 和超聲時間對樺褐孔菌多糖提取效果影響相對較 大, 即的超聲功率和超聲溫度時樺褐孔菌的多 糖提取量,達到顯著水平(P<0.05),其次為提取 溫度、料液比。小鼠灌胃給藥 8 周后,與模型組比較,不同濃度 的樺褐孔菌多糖提取物對小鼠肝臟有不同程度的改 善, 其中高劑量給藥組肝臟指數明顯降低, 達到 60.31 mg / g,低劑量給藥組的肝臟指數為 69.72 mg / g。灌胃給藥 8 周 后, 小鼠血清中 TC、TG、LDL、 HDL 及 ALT 均有不同程度的改善。 結果表明,與模 型組相比,小鼠血清中的 TG 水平比正常組高,給藥 組小鼠血清中 TG 含量稍有降低,但并不顯著;模型 組小鼠血清中*水平為 4.58 mmol / L,給藥組小 鼠血清中*水平明顯下降(P<0.01),分別為 2.16 mmol / L 和 3.32 mmol / L;與模型組相比,樺褐孔菌 高濃度給藥組小鼠血清中的 LDL、HDL 水平顯著降 低(P<0.01),分別下降到 0.36 mmol / L 和 1.97 mmol / L, 低劑量給藥組下降到 0.75 mmol / L 和 2.52 mmol / L; 與模型組相比,樺褐孔菌不同濃度給藥組小鼠血清 中 ALT 水平下降明顯(P<0.01)。



3 討論

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是指雖無過量飲酒史但類似于酒精性脂肪肝的肝臟組織學病變的一種 嚴重危害人類健康的慢性疾病。 目前,中國 NAFLD 的發病率為 15%左右, 并呈現逐年上升的趨勢,已 經成為一種嚴重危害人類健康的世界性疾病, 但其 發病機制尚不清楚 。



 


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