( aflatoxins，AFs) 主要是由黃曲 霉( Aspergillus flavus) 和寄生曲霉( A． parasiticus) 等真菌產生的一類有毒次生代謝物，在自然界中 廣泛存在，侵染包括小麥、玉米、花生、大豆和稻米 等農作物，對人畜有強烈的致病性、致癌性，不僅能夠引起急性和亞急性中毒，還能夠引起黃疸、貧 血、肝臟損傷以及胃癌、肺癌、結腸癌等，是毒性的真菌毒素。目前發現的共有 20 余種，根據在紫外光照射下產生熒 光顏色的不同，可將其分為 B 族和 G 族兩大類及其衍生物，在紫外光照射下，B 族毒素發出藍色熒 光，G 族毒素發出綠色熒光。植物來源的食物 易受到 B1 ( AFB1 ) 、 B2 ( AFB2 ) 、 G1( AFG1 ) 和 G2 ( AFG2 ) 的污染。其中 AFB1 的毒性作用， 1993 年世界衛生組織( World Health Organization， WHO) 的國際癌癥研究機構將 AFB1 列為Ⅰ類致癌物。

1 材料與方法

1. 1 考核樣品

考核樣品由 FAO 委托 Texas A＆M 大學提供， 4 輪考核均為玉米粉樣品，要求測定其中 B1 含量及總量( B1、B2、G1 和 G2 ) 。100 g 考核樣品分別稱取，每份 2 g，共稱得 樣品 50 份，進行提取、凈化和測定。正式測定前 *行預試驗。

1. 2 儀器和試劑

ACQUITY UPLC 超高效液相色譜串聯三重 四極桿質譜儀( 美國 Waters 公司，Xevo TQS 型) ; 冷凍離心機( 3K15，Sigma 公司) ; 其林貝爾旋渦混合器VORTEX-5; 氮吹儀 ( N-EVAP 型，美 國 Organomation 公 司) ; Waters BEH C18 色 譜 柱 ( 100 mm × 2. 1 mm，1. 7 μm) ; MultiSep 226 固 相 萃 取 柱 ( 北 京 Ｒomer 公 司， 5 mL) ; Milli-Q 型純水儀( 美國 Millipore 公司) ; 甲 醇、乙腈( Fisher，質譜級) ; 甲酸、乙酸銨( 色譜級， Dikma 公 司 ) ; 氨 水 ( 色 譜 純，德 國 CNW Technologies GmbH) 。 標準品及同位素內標: AFB1、AFB2、AFG1 和AFG2 的 標 準 混 合 溶 液 ( 北 京 Ｒomer 公 司， 0. 5 μg /mL) ; 13C- B1( 13C-AFB1 ) 、13C B2 ( 13 C-AFB2 ) 、13 C- G1 ( 13C-AFG1 ) 和13C- G2( 13C-AFG2 ) 的標 準混合溶液( 北京 Ｒomer 公司，0. 5 μg /mL) ，純度 ＞98%，－20 ℃儲存。

1. 3 樣品前處理

準確稱取玉米粉樣品 2 g( 精確至 0. 01 g) ，轉 移至 50 mL 的離心管中，加入 100 ng /mL 同位素 內標 100 μL，室溫靜置 2 h，加入 10 mL 乙腈/水溶 液( 86 ∶ 14，V /V) ，室溫下翻轉混合 1 h，超聲提取 30 min，9000 r /min 離 心 15 min，取 上 清 液，待 凈化。 取上清液過 MultiSep 226 凈化柱，收集流出 液。準確吸取 5 mL 流出液，在 40 ℃水浴下，氮吹 近干，用 1 mL 初始流動相復溶后，超高速 18000 r /min 下離心 15 min，取上清液于進樣小瓶中，待 上機檢測。

1. 4 儀器條件

1. 4. 1 液相色譜條件

采用 Waters BEH C18色 譜柱( 100 mm×2. 1 mm，1. 7 μm) ; 柱溫 40 ℃ ; 進樣 量 5 μL; 流速 0. 35 mL /min; 流動相 A 為 0. 1%甲 酸水溶液，流動相 B 為甲醇，梯度洗脫: 0 ～ 1. 0 min，5% ～ 32% B; 1. 0 ～ 5. 0 min，32% ～ 35% B; 5. 0 ～ 8. 0 min，35% ～ 42% B; 8. 0 ～ 9. 0 min，42% ～ 90% B; 9. 0 ～ 10. 0 min，90% B; 10. 0 ～ 10. 1 min， 90% ～ 5% B; 10. 1 ～ 13. 0 min，5% B。

1. 4. 2 質譜條件

電離模式采用電噴霧正離子 化模式( ESI+ ) ，離子源溫度 150 ℃，毛細管電壓 3. 0 kV，脫溶劑氣溫度 500 ℃，脫溶劑氣流速 800 L / h，錐 孔 氣 流 速 150 L / h，碰 撞 氣 流 速 0. 2 mL /min; 多反應監測( MＲM) 模式掃描。

1. 5 比對結果評價方法

采用 Z 評分進行結果評價。Z 評分是 由能力驗證的值( 或均值) 和能力評定標準 偏差計算的實驗室偏倚的標準化度量，按照以下 準則對實驗結果進行判定: ∣ Z ∣≤2 表示結果 “滿意”，即產生“理想結果”的情況超過 95%; 2＜ ∣ Z ∣＜3 表示結果“有問題或可疑結果”，即產 生“理想結果”的情況約等于 5%，實驗室應認真 檢查結果偏差較大的原因; ∣ Z ∣≥3 表示結果 “異常值或離群結果”，即產生“理想結果”的情況 大約僅有 0. 1%。

2 結果

樣品中 B1 及其總量的含量與樣 品的取樣范圍有關，考核中 2 g 為 1 份子樣品，表1 為比對考核中樣本中含量的分布 情況。

4 輪次的考核中，組織者要求進行 B1 和總量( Total AFs) 的測定。由 組織者提供的分析報告顯示，每輪次中約 100 個實驗室參加比對考核，包括國家實驗室、區 域實驗室及商業實驗室等，采用的方法有快速檢 測法，高效液相色譜法及高效液相色譜串聯質譜 法，參加比對考核的實驗室提供了 AFB1 和/或總量的結果。

3 討論

在對的檢測過程中，本實驗室總 結了一些實驗操作過程中的關鍵控制點。包括在內的真菌毒素在樣品中的 分布是不均勻的，因此在分析過程中取樣的代表 性非常重要，往往影響含量的測定結果。2016 年 本實驗室參加考核，實驗室將發放的 100 g 考核樣品分別稱取，每份 2 g，共稱得樣品 50 份， 采用考核的測定方法進行提取、凈化和測定，結果 顯示，不同的取樣范圍決定了樣品中 AFB1 及其 總量的含量分布。表 1 給出了 2016 年第 2 輪次 的樣品取樣量與含量分布情況。同樣，在 2017 年 2 個輪次的考核中，樣品的取樣份數影響著 AFB1 及其總量的含量分布。為增加測定結果的準確性，在進行樣品的檢測時應做到對全部的考核樣品進行測定。



 

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