0 引言

膝骨關節炎是常見于中老年人群的一種以退行性改變 為主的常見病、多發病，一般認為屬于中醫學“骨痹”類， 其發病原因目前尚未*闡明。有研究顯示膝骨關節炎的 發病與高齡、女性、體質量指數、關節外傷、關節過度使 用、骨密度、肌力等因素高度相關。中國目前已進入老 齡化社會，膝關節骨性關節炎作為中老年人的常見病，其 發病率也較高。上海有學者通過調查1 499名對象研究得出 結論，年齡≥40歲者膝骨關節炎患病率為33.3%。腎臟陰 陽兩虛、外感寒濕、肝氣虛、陰虛、氣虛、陽虛、瘀血是 “骨痹”見的病機因子。

1 材料和方法

1.1 設計

隨機對照動物實驗。

1.2 時間及地點

于2014年2至4月在黑龍江中醫藥大學 實驗動物中心進行實驗并采集觀察指標。

1.3 材料

1.3.1 實驗動物

健康4周齡雄性新西蘭大白兔50只，體 質量(1.2±0.1) kg，平均1.2 kg，由黑龍江中醫藥大學實驗 中心提供。實驗動物生產許可證號：SCXK(黑)2013-004， 實驗動物使用許可證號：SYXK(黑)2013-012，實驗過程中 對所有動物的處置依照《關于善待實驗動物的指導性意見》 中的相關規定。實驗方案經黑龍江中醫藥大學動物實驗倫 理委員會批準。

1.3.2 主要實驗藥材、試劑及儀器

一次性獨立包裝漢章 Ⅰ型4號φ0.25 mm×30 mm，(北京華夏醫療器械 廠，藥(械)準字：2011第2270164號)；*，規格：10 mL/支(正大青春寶制藥，國藥準字Z)； utrao-SM 800全自動酶標儀(上海永創醫療器械有限公 司)；石蠟切片機(U-641型，美國貝克曼公司)；光學顯微 鏡照相系統(BH-5型,日本Olympus公司)；數碼X光機 (CEx86型，美國GE公司)；微型振蕩器MH-1型(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；小型高速離心機(Eppendorf 中國有限公司)；兔白細胞間介素ELISA試劑盒(欣博盛，貨 號RBE015)，兔腫瘤壞死因子ELISA試劑盒(欣博盛，貨號： RBE102a.48)；低糖型DMEM細胞培養液(北京博奧森生物 技術公司)；40 g/L多聚甲醛(山東省壽光市旭東化工有限公 司，CAS號：30525-89-4)；*(5 mL，石家莊 第四制藥有限公司) 。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗動物分組及造模

將50只健康新西蘭白兔隨機 分為5組進行實驗：空白對照組、模型組、單純* 組、單純閉合松解組(組)、閉合松解結合丹參 注射液組關節腔注射組(聯合*組)，每組各10 只。所有動物同等條件下飼養1周，穩定后，除空白對照組 外其他4組兔均參考張子峰等報道的方法造模：將兔取左 側臥位，于右側髖關節大轉子后約1 cm處為中點，上下直切 口3 cm，分離髂內靜脈屬支臀下靜脈，雙重結扎，結扎線 間切斷。仰臥位，右側腹股溝觸及動脈搏動處作1 cm縱形切 口，分別分離股靜脈、大隱靜脈，分別雙重結扎后于結扎線 間切斷。于右側膝關節間隙水平切斷腓腸肌內、外側頭，切 除5 mm長一段跟腱。所有手術切口縫合皮下組織、皮膚后 敷蓋乙醇紗布、棉墊。造模后連續3 d注射*5 U/(kg•d)、 *10×104 U/(kg•d)，所有動物分籠飼養。造模后每日驅 趕動物活動2 h，共驅趕動物2周，2周后動物出現關節僵硬、 瘸行，關節周圍可觸及條索結節，X射線片顯示下肢力線 右外翻10°變為內翻，提示造模成功。

1.4.2 各組干預方法

(1)組：成功建模后第2天開始干預，首先暴露實 驗動物右側膝關節，觀察右側下肢是否出現腫脹、變形和 肌肉，對膝關節進行按壓檢查。觸診點：內外側支持 帶、內外側膝眼；膝關節上方髕上囊、股四頭肌各肌肌腹； 膝關節內側股薄肌肌腹及止點、收肌肌群肌腹及止點和脛 骨平臺附近。松解每次選取上述部位病理性結節或條 索10個，常規消毒術，無麻醉。依照操作流程先定點， 再定向，之后刺入靶點組織，以通透剝離手法加壓切割病 變組織。屈伸牽張膝關節，每只兔子每次給予10 min手法 松解牽張。每周1次，持續5周。
(2)空白對照組及模型組：給予兔關節腔注射生理鹽水 0.3 mL，每周1次，共5次。
(3)*組：給予兔關節腔注射0.3 mL丹參注射 液，每周1次，共5次。
(4)聯合*組：每周進行1次治療， 具體干預方法及干預頻率同組。每次干預之后， 關節腔注0.3 mL*。

1.4.3 兔膝關節軟骨大體觀察

干預結束后，麻醉下耳緣靜脈空氣栓塞處死動物。切開關節囊，暴露脛骨、股骨軟 骨面，大體觀察兔膝關節軟骨面情況。

2 結果

實驗選用新西蘭白兔50只，分為 5組，實驗過程無脫失，全部進入結果分析。空白對照組膝關節軟骨無明顯 磨損, 周圍滑膜無明顯增生及炎性改變。模型組液組膝關 節磨損較為嚴重，軟骨破壞達到3級，但并未暴露軟骨下骨, 周圍滑膜增生及炎性改變較為明顯。組、* 組、聯合*組膝關節輕度磨損，1級到2級， 周圍滑膜增生及炎性改變不明顯，兩組在大體觀下無法辨 別磨損嚴重程度的差異。空白對照組 軟骨表明光滑、軟骨細胞梭形排列，形態、數目、結構基 本正常，無血管翳生成；模型組表層軟骨細胞明顯減少， 細胞排列紊亂；組軟骨表層較為光滑、軟骨細胞數目 結構基本正常；*組軟骨表層光滑、軟骨細胞排 列輕度紊亂，局部缺損；聯合*組軟骨表層 較為光滑，軟骨細胞數量結構基本正常。見圖1。病理切片 評分，*組評分略高于組和聯合丹參注 射液組，但此3組之間差異無顯著性意義。見表1。


3 討論

膝關節退行性骨關節炎是關節炎 中見的一種，也是造成膝關節疼痛、僵硬、功能喪失 的原因之一。隨著老齡化的不斷加重，國外有學者預 測到2030年，膝骨關節炎將成為人群中最主要的獨立致殘 原因，這將不僅影響個體的生活質量，還將增加醫 療保障體系的負擔。傳統上，膝關節退行性骨關節炎的治 療包括語言治療、、康復、口服藥物和手術治療。 近十余年，隨著對再生醫學的研究加深，干細胞治療膝關 退行性骨關節炎也展現出很大的潛力。雖然膝關節骨關節 炎的治療方法很多，但脛骨高位截骨術、全膝關節置換等 治療方法針對退行性骨關節炎終末期的患者、且對于適應 證和手術醫師有嚴格的要求。在國內手術條件、患者 理念的影響下，可以行動的患者對開展手術的意愿并不 高。手術及中藥關節腔注射，作為國內的治療 方法，有很好的群眾基礎。目前國內每年舉辦培訓班 超過千次，參加培訓的醫師兩萬余人，接受治療 的患者數量無法統計。據估計，已在英國等30多個國 家開展，正在逐漸走出、服務世界。因而研究 技術對關節炎的治療作用擁有很大的臨床價值。對于關節 腔注射來說，中藥注射為患者提供了關節腔注射透明質酸 和激素之外的第3個選擇，已經被證明臨床中有效且不存在關節腔注射激素的不良反應。此次實驗中，兩組療法結 合優于單獨使用一種療法，因而關節腔注射和療法相 結合，經過不斷完善，將希望成為膝骨關節病序貫治療方 案的重要組成部分。