1 材料與方法 

1． 1 材料 

1． 1． 1 菌株和試劑

黃原膠高產菌株 XccYH1 由本實驗室通過基因工程方法獲得。抗生素*購自 Sigma 公司。 

1． 1． 2 儀器

PB － 10 pH 計( SAＲTOＲIUS AG) ; MP2002 電子天平( 上海恒平科學儀器有限公司) ; DHP － 9052 型電熱恒溫培養箱( 上海一恒科學儀器有限公司) ; SW － CJ － 2FD 潔凈工作臺( 蘇州安泰空氣技術有限公司) ; ZHWY200B 恒溫培養振蕩器( 上海智城分析儀器制造有限公司) ; LS － B50L －Ⅱ立式壓力蒸汽滅菌鍋( 江陰濱江醫療設備有限公司) ; QL －902 漩渦混合儀( 海門市其林貝爾儀器制造有限公司) ; DHG－ 9240 鼓風干燥箱( 上海一恒科學儀器有限公司) 。 

1． 2 方法 

1． 2． 1 野油菜黃單胞菌胞外多糖的檢測

將菌株 XccYH1接種于 NYG 液體培養基( 5 g /L 蛋白胨，3 g /L 酵母粉，20 g /L甘油) 中，30 ℃ ( 200 r/min) 搖床培養 24 h 后，調整菌體濃度至 OD600約為 1． 0，并按 1% 的比例接種至含 4% 碳源的 NYG 中( 含相應抗生素) ，30 ℃ ( 200 r/min) 搖床培養 5 d后，加入 4 倍體積的無水乙醇沉淀胞外多糖，邊注入邊攪拌，然后將絮狀沉淀物取出后置于 42 ℃ 充分干燥，所得即為黃原膠。以黃原膠重量作為衡量發酵效果的標準。 

1． 2． 2 碳源對黃原膠發酵的影響

以淀粉、葡萄糖、麥芽糖和蔗糖作為培養基碳源，考察碳源對黃原膠發酵的影響。在NYG 中加入 4% 淀粉、4% 葡萄糖、4% 麥芽糖和 4% 蔗糖作為培養基，按照“1． 2． 1”方法進行黃原膠發酵，每組發酵設計平行做 3 個。

2 結果與分析

為進一步提高基因工程菌 XccYH1 的黃原膠產量，首先探索不同碳源對黃原膠產量的影響。以淀粉、葡萄糖和麥芽糖為碳源時，黃原膠產量無顯著性差異，而以蔗糖為碳源時，所產的黃原膠產量，后續試驗中以蔗糖作為碳源測定黃原膠產量。在低濃度碳源( 2% ～ 6% ) 時，黃原膠產量隨著濃度的增加而顯著增加，當添加 6% 蔗糖時黃原膠 產 量 ，達20． 3 g /L。但繼續提高碳源濃度到 8% ，顯著抑制菌體生長，也沒有檢測到黃原膠。因此，碳源濃度為 6% 時，黃原膠產量。基因工程菌的穩定性往往是能否進入工業化應用的重要評價指標，在非抗生素壓力條件下穩定性好的菌種將具有更好的應用前景，該研究將 XccYH1 菌株在無抗性的培養基上連續劃線傳 10 代后，菌落形態沒有差異，進一步考察了傳不同代數時黃原膠的產量。

3 結論與討論 

野油菜黃單胞菌( Xcc) 是十字花科植物黑腐病菌的病原菌，在范圍內引起植物病害，造成重大的經濟損失。Xcc在植物侵染過程中產生眾多的致病因子，包括蛋白酶、纖維素酶、胞外多糖等，因此 Xcc 也是研究細菌與植物互作的模式菌種。另一方面，Xcc 產生的胞外多糖( 黃原膠) 又具有重要的工業價值，在食品、藥品、化妝品等諸多領域中有廣泛的應用。

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