光光度計的理論依據是建立在光的吸收定律上的。光的吸收定律又稱：朗伯-比爾定律。就是利用物質在光的照射激發下，具有選擇性吸收現象來對物質進行定性和定量分析。

T =I/I₀×100％

I₀：入射的單色光強度
I：出射的單色光強度
T：透射比強度（透光率），用百分數表示。
朗伯-比耳定律：A=KCL
A=log 1/T = -log T

A：吸光度 （吸收比強度）
K：吸光系數
C：樣品的濃度（g/l）
L：比色皿的寬度（cm）

吸光度：當一束平行的單色光，垂直照射在均勻的被測樣品時，該樣品就有一定的吸收，樣品對入射光減弱吸收的程度，稱為吸光度，通過儀器便可測出，吸光度是沒單位的一個量。從以上公式中可以看出，當入射光強度一定時，物質的吸光度與物質中吸光物質的濃度和物質厚度的乘積成正比。