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IEC-6細胞|大鼠小腸隱窩上皮細胞IEC-6 處理方法

來源:上海琛藝實業有限公司   2020年01月02日 14:53  

IEC-6細胞|大鼠小腸隱窩上皮細胞IEC-6 處理方法
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外大學建系
細胞形態特性:詳見細胞說明書

中文名稱大鼠小腸隱窩上皮細胞;IEC-6
英文名稱IEC-6
規格
    • T25
    價格
    • 面議
    形態特性上皮細胞樣
    生長特性貼壁生長
    特征特性*可抑制該細胞的生長。該細胞表達腸上皮*抗原,在20代以前保持恒定的生長速度和細胞形態,此后生長速度迅速下降,細胞形態也發生改變。
    培養條件DMEM(HG)+0.1Unit/mlbovineinsulin+10%FBS(GIBCO)
    傳代方法1:2傳代
    凍存條件無血清細胞凍存液
    STR 
    備注本庫的細胞系(株)僅用于科研工作,未經許可不得用于其他目的。使用者不得將本庫細胞系(株)轉讓給第三者。

    5571-36-8
    IEC-6[IEC6] Cell
    細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分
    IEC-6[IEC6] Cell;大鼠小腸隱窩上皮細胞
    細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
    NCI-H1651細胞系;細胞傳代方法:1:3-1:8傳代,每周換液2次;細胞形態特性:上皮細胞;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
    A-431[A431]細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
    HHORSC細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
    TFH細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:懸??;細胞背景資料:輔助性T細胞
    可以這樣說,對于需要消化傳代的細胞,每一次的消化都是對這個細胞存活與否,狀態好與不好至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題,自己養的細胞開始的幾代長的還挺好的,可是穿過幾代之后就發現自己的細胞不行了,狀態越來越差勁了。對于這個問題,可以非??隙ǖ卣f,你的消化環節出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以,越長越差。在消化的過程中,你加入*后,所有細胞都在被*消化著,但是我們忽視了一個問題就是,細胞的生長狀態是不一樣的,每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的,他們受到了差別待遇當然會有脾氣的,大家爭取做到因材施教,比如試試下面的“四步消化法”。(以難消化細胞為例),具體操作:1)首先不加*,倒掉舊培養基加入少量新培養基洗1-2遍(目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉)。2)然后再加入少量新培養基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。(你可以將這些傳入新瓶培養,以與后面*消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對*的敏感度了)3)吸干凈瓶內剩余液體,加入0.3ml左右的*潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的*消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察,待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉*,加入新培養基開始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養,以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的*重新加進去瓶里繼續消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的*,如果你們那比較富裕的話,繼續鏡下觀察,待剩余細胞間隙明顯,細胞獨立開來的時候,吸掉*,加入新培養基吹打。懸液傳入新瓶培養(依據實際情況把握)。

    <1>本公司的豬鼻甲黏膜成纖維細胞,PT-K75發貨有四種形式:T25瓶、離心管、血清及干冰。
    T25是用T25細胞培養瓶直接發貨的形式。收到細胞后,拆開包裝T25瓶的自封袋,不拆封口膜,表面噴75%酒精消毒后顯微鏡觀察細胞狀態(有條件可以拍下此時細胞照片)。將細胞放入37度培養箱平衡兩小時以上,再處理細胞。首先將T25中培養基取出裝好備用,如細胞密度高于80%,可以直接消化傳代,相反則加入5-6mL培養基放回培養箱繼續培養即可。
    離心管是用15mL離心管發貨的方式,只用于懸浮細胞發貨。收到細胞后消毒處理及平衡參考上述T25瓶。平衡完成后,離心(1000rpm,3min)收集細胞,棄上清,用新的培養基重懸細胞并接種至培養瓶或皿中,放回培養箱繼續培養。
    血清是用牛血清直接發貨的形式,是細胞凍存管加入含有細胞的牛血清的形式。收到細胞后,拆開自封袋,凍存管表面噴75%酒精消毒后,在超凈臺中打開凍存管,將細胞用1mL槍頭輕輕幾次以將細胞吹勻,接種至含有預熱的培養基的培養瓶或皿中,顯微鏡下觀察細胞是否吹勻,如果沒有吹勻,繼續吹勻至3-5個細胞一團,放回培養箱繼續培養。
    干冰是用本公司凍存液凍存細胞后,直接用干冰將凍存的細胞冷凍發貨的形式。收到細胞后按照細胞復蘇的步驟操作即可。
    <2>相關問題
    如不能在收到后及時操作細胞,T25及離心管發貨的細胞可以消毒后在37度過夜,血清發貨的細胞可以在室溫下靜置1-2天(注意不要放冰箱),干冰發貨的可以在確認干冰未*升華時將細胞直接放回液氮或者-80度冰箱,若干冰*升華,請即刻復蘇細胞。
    T25瓶及離心管在培養箱平衡是為了讓細胞盡快適應培養箱環境,同時使部分因運輸導致脫落的細胞貼壁,此步驟非常必要。T25瓶如果在顯微鏡下可以看到部分不貼壁的細胞,可以收集上清后離心(1200rpm,5min)后,將沉淀用新的培養基重懸后接種至新的培養瓶或皿中。
    部分細胞在運輸過程中,由于不斷震蕩及環境不適,可能導致細胞破碎死亡,從而使培養基中漂浮很多細胞碎片及顆粒狀物質。這種情況下,平衡后,貼壁細胞用PBS洗兩遍在加新的培養基培養或者傳代至新瓶中培養即可;懸浮細胞可以離心(1000rpm,3min)收集細胞,并用PBS重懸后再離心一次,再用新的培養基重懸并接種細胞。

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