研伴實業(yè)植物酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒 產品說明書（中文版）

主要用途

植物酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過酸性磷酸酶反應系統(tǒng)中對硝基酚磷酸水解后產物峰值的變化，即采用比色法來測定植物組織裂解懸液樣品中酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種植物組織，包括種子、球莖（bulb）、塊莖（tuber）、根（root）、種葉（coleoptile）和葉片裂解懸液樣品或純化以及粗提的酶蛋白酸性磷酸酶的總活性檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術背景

酸性磷酸酶（acid phosphatase；ACP；EC 3.1.3.2），是一種酸性水解酶（acid hydrolase）和去磷酸化酶，即磷酸單酯酶（phosphomonoesterase），在酸性環(huán)境下，水解磷酸單酯化合物而釋放出無機磷。酸性磷酸酶活性與細胞生長、能量代謝、代謝調節(jié)、信號通道等功能有關。在動物體內和植物中普遍存在。植物酸性磷酸酶是植物和土壤中普遍存在的水解酶，其活性高低與植物和土壤中的磷素水平密切相關。間接影響植物光合成、呼吸和生長等。植物酸性磷酸酶在種子、球莖（bulb）、塊莖（tuber）、根（root）、種葉（coleoptile）和葉片組織中高度表達。基于對硝基酚磷酸（p-nitrophenyl phosphate）在酸性磷酸酶的催化下，產生磷酸（phosphate）和生色產物對硝基*（p-nitrophenol），在分光光度儀下，其吸光值的變化（410nm 波長），來定量測定酸性磷酸酶的總活性。酸性磷酸酶反應系統(tǒng)為：

產品內容

清理液（ReagentA） 毫升

裂解液（Reagent B） 毫升

緩沖液（Reagent C） 毫升

底物液（Reagent D） 毫升

終止液（Reagent E） 毫升

陰性液（Reagent F） 微升

產品說明書 1 份

保存方式

保存底物液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；底物液（Reagent D）避免光照；終止液（Reagent E）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證 6 月

用戶自備

15 毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器

1.5 毫升離心管：用于樣品保存的容器

DOUNCE 勻漿器：用于裂解組織樣品恒溫培養(yǎng)箱：用于反應物孵育的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品制備

比色皿或酶標板：用于比色的容器

分光光度儀或酶標儀：用于比色分析

實驗步驟

一、 樣品準備

1． 準備好新鮮的植物組織，并秤重以確定組織重量 200 毫克

1． （選擇步驟）放進預冷的 15 毫升錐形離心管

2． （選擇步驟）加入 xx 毫升 清理液（Reagent A ）清洗 1 次

3． 移入到一個液氮凍存管

4． 即刻放進液氮罐過夜

5． 次日從液氮罐里取出，即刻（快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意： 切莫使組織凍融 ）

6． 放進一個 15 毫升錐形離心管

7． 加入預冷的 xx 微升 裂解液（Reagent B ）

8． 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻

9． 即刻放入預冷的 DOUNCE 勻漿器

10．在冰槽里用研磨棒勻化組織（約 80 下）

11．將所有組織勻漿物移入 1.5 毫升離心管

12．放進 4℃微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

13．小心移取 500 微升上清液到新的預冷的 1.5 毫升離心管

14．移取 10 微升進行蛋白定量檢測（注意： 建議使用 Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒－ GMS30030.1）

15．即刻放進－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作

二、 測定準備

1． 準備好上述待測樣品，置于冰槽里

2． 設定好分光光度儀（溫度為 37℃）：波長 410nm，并置零

3． 緩沖液（Reagent C ）室溫下均衡溫度

三、 背景對照測定

1． 移取 xx 微升 緩沖液（Reagent C ）到新的比色皿

2． 加入 xx 微升 底物液（Reagent D ）

3． 加入 xx 微升 陰性液（Reagent F ）

4． 上下傾倒數(shù)次，混勻

5． 放進 37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育 30 分鐘，避免光照

6． 加入 xx 微升 終止液（Reagent E） ），混勻

7． 即刻放進分光光度儀檢測，此為背景空對照讀數(shù)

四、 樣品活性測定

1． 移取 xx 微升 緩沖液（Reagent C ）到新的比色皿2． 加入 xx 微升 底物液（Reagent D ）

3． 加入 20 微升待測樣品（總量 50 微克蛋白）

4． 上下傾倒數(shù)次，混勻

5． 放進 37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育 30 分鐘，避免光照

6． 加入 xx 微升 終止液（Reagent E） ），混勻

7． 即刻放進分光光度儀檢測，此為樣品讀數(shù)

五、 計算樣品活性

六、 酶標板測定

1． 在 96 孔酶標板上做好相應標記：背景對照和待測樣品

2． 分別移取 xx 微升 緩沖液（Reagent C ）到所有孔中

3． 分別加入 xx 微升 底物液（Reagent D ）

4． 分別加入 xx 微升 陰性液（Reagent F ）或待測樣品（20 微克蛋白）到相應孔中

5． 輕輕搖動酶標板

6． 放進 37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育 30 分鐘，避免光照

7． 加入 xx 微升 終止液（Reagent E ）

8． 輕輕搖動酶標板

9． 即刻放進酶標儀檢測

10．活性計算

注意事項

1． 本產品為 20 次（比色皿）和 80 次（酶標板）操作，包括背景對照

2． 操作時，須戴手套

3． 終止液（Reagent E ）具有腐蝕性，注意操作安全

4． 系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需 1 次

5． 樣品須澄清，至關重要

6． 避免使用氟化物（fluoride）、酒石酸（tartrate）、草酸鹽（oxalate）、氯苯丁酯（clofibrate）等處理樣品

7． 比色測定后，比色皿須清洗*

8． 樣本測定讀數(shù)升高表明具有酶活性

9． 建議待測樣本蛋白濃度為50微克/20微升（本公司提供 Bradford蛋白質濃度定量試劑盒GMS30030.1）

10．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度

11．酸性磷酸酶單位活性定義為：在 37℃，pH 5.0 條件下，每分鐘內能夠釋放 1 微摩爾對硝基*所需的酶量作為一個活性單位

12．本公司提供系列酸性磷酸酶類檢測試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產品經鑒定檢測敏感使用承諾

秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后 10 天內若發(fā)現(xiàn)確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司通知，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHATYOU DID WRONG 。

訂購信息

單組分訂購信息

編號 名稱 規(guī)格

GMS50049.4 植物酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒 20/80 次

GMS50049.4A 清理液（ReagentA） 毫升

GMS50049.4B 裂解液（Reagent B） 毫升

GMS50049.4C 緩沖液（Reagent C） 毫升

GMS50049.4D 底物液（Reagent D） 毫升

GMS50049.4E 終止液（Reagent E） 毫升

GMS50049.4F 陰性液（Reagent F） 毫升