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免疫組化安排樣本的處理辦法

來源:上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司   2018年05月03日 09:16  

安排處理
恰當(dāng)?shù)陌才盘幚硎亲龊妹庖呓M化染色的先決條件,也是決議染色勝敗的內(nèi)部因素,在安排細(xì)胞材料預(yù)備的過程中,不只要求堅(jiān)持安排細(xì)胞形狀完整,更要堅(jiān)持安排細(xì)胞的抗原性不受損或充滿,避免安排自溶。如果呈現(xiàn)自溶壞死的安排,抗原現(xiàn)已丟掉,即運(yùn)用很活絡(luò)的檢測(cè)抗體和高明的技能,也很難檢出所需的抗原,反而往往由于安排的壞死或制片時(shí)的刀痕擠壓,在上述區(qū)域易呈現(xiàn)假陽性成果。
1) 安排及時(shí)選材和固定
安排標(biāo)本及時(shí)的選材和固定是做好免疫組化染色的要害*步,是有用避免安排自溶壞死,抗原丟掉的開始,離體安排應(yīng)趕快的進(jìn)行選材,2h內(nèi),選材時(shí)所用的刀應(yīng)鋒利,要一刀下去切開安排,不行重復(fù)切拉安排,形成安排的擠壓,安排塊巨細(xì)要適中,一般在2.5cm×2.5cm×0.2cm,牢記選材時(shí)安排塊寧可面積大,千萬不能厚的準(zhǔn)則,(也就是說安排塊的面積能夠大到3cm×5cm,但安排塊的厚度千萬不能超越0.2cm,不然將晦氣于安排的均勻固定)。固定液快速滲透到安排內(nèi)部使安排蛋白能在一定時(shí)刻內(nèi)敏捷凝結(jié)。然后無缺的保存抗原和安排細(xì)胞形狀。
對(duì)于固定液的選擇,準(zhǔn)則上講,應(yīng)根據(jù)抗原的耐受性來選擇相應(yīng)的固定液,但除非是專項(xiàng)科研項(xiàng)目,在病理慣例作業(yè)很難做到這一點(diǎn),由于病理的確診和辨別確診都是在慣例HE病理確診的基礎(chǔ)上決議是否進(jìn)行免疫組化的染色,而HE染色的慣例安排處理是采用10%的中性緩沖福爾馬林或4%緩沖多聚甲醛4倍于安排體積進(jìn)行安排固定,使用其滲透性強(qiáng),對(duì)安排的作用均勻進(jìn)行固定,但安排固定時(shí)刻在l2h內(nèi),一般固定時(shí)刻不應(yīng)超越24小時(shí)。隨著固定時(shí)刻的延伸對(duì)安排抗原的檢出強(qiáng)度將逐步下降。
2) 安排脫水、通明、浸蠟
安排經(jīng)固定后進(jìn)行脫水、通明、浸蠟和包埋。把握的準(zhǔn)則是脫水通明要充分但不能過,浸蠟時(shí)刻要夠,溫度不能高,不然形成安排的硬脆使安排切片困難,即使能切片,由于安排的硬脆,也使切片不能無缺平整,染色過程中極易脫片,對(duì)免疫組化染色抗原的定位及布景都晦氣,所以*脫水和二甲苯通明的時(shí)刻不宜過長,正常巨細(xì)的安排*脫水lh×3次,二甲苯通明lh×2次即可,浸蠟及包埋白臘溫度不要超越65℃。
免疫組化試驗(yàn)代測(cè)之免疫組化的樣本處理切片染色注意事項(xiàng)
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培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清:胎牛血清,人血清,動(dòng)物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原裝血清 。
生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
規(guī)范品對(duì)照品:進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口規(guī)范品.
抗體:一抗,二抗,流式抗體等。
放免試劑盒:進(jìn)口放免試劑盒,國產(chǎn)放免試劑盒,進(jìn)口美國鳳凰等品牌放免試劑盒。
試驗(yàn)室代測(cè)服務(wù):放免代測(cè),WB試驗(yàn),免疫組化代測(cè),熒光定量PCR代測(cè),病理細(xì)胞染色代測(cè),生化試驗(yàn)代測(cè)等。

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