按ELISA試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾 水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。ELISA試劑盒從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
ELISA試劑盒的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。 一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。為了優化靈敏度，建議孵育標準品和標本。若使用過氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物ELISA試劑盒酶的活性。
ELISA試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內醫學檢驗一般均用板式點。    本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點，ELISA檢測試劑盒珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應用。
可用作ELISA試劑盒測定的標本十分廣泛，體液（如血清 ）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體 或抗原成份。ELISA試劑盒有些標本可直接進行測定（如血清 、尿液），有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。