信帆生物技術部分享：影響ELISA實驗結果，樣本因素有哪些！

本文就標本因素對 ELISA 測定的影響做如下討論。

血清是zui常用的 ELISA 標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，

有人認為大約 40% 的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應物質和其它物質等。

（1）類風濕因子

人血清中 IgM、IgG 型類風濕因子（RF）可以與 ELISA 系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的 FC 段直接結合，從而導致假陽性。

解決該情況的辦法有：

①用 F(ab)2 替代完整的 IgG；

②標本用聯有熱變性（63℃，10 min）IgG 的固相吸附劑處理（將熱變性 IgG 加入到標本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時，可以用 2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中，使 RF 降解。

（2）補體 ELISA 系統中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發生變構，其 FC 段的補體 C1q 分子結合位點被暴露出來，使 C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用 EDTA 稀釋標本；②用 53℃，10 min 或 56℃，30 min 加熱血清使 C1q 滅活。

（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體，可將 ELISA 系統中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過量的動物 Ig (s) ，但加入量不足或亞類不同時無效。

（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在 ELISA 方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。

（5）醫源性誘導的抗鼠 Ig (s) 抗體 臨床開展的用鼠源性 CD3 等單克隆抗體治療，用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術，均有可能使這些病人體內產生抗鼠抗體；另外，被 鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠 Ig (s) 抗體。這些病人 ELISA 測定時均可產生假陽性。解決的辦法是：測定抗原時，在標本中加入足量的正常鼠 Ig (s) ，從而克服由于上述原因造成的假陽性。

（6）交叉反應物質 類 AFP 樣物質等，是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時，也會出現假陽性結果。

（7）標本中其它成分的影響 血清脂質過高、*、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對 ELISA 測定結果有干擾作用。

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