一、 測量原理                

分光光度法測量的理論依據是伯郎—比耳定律：當容液中的物質在光的照射和激發下，產生了對光吸收的效應。但物質對光的吸收是有選擇性的，各種不同的物質都有其各自的吸收光譜。所以根據定律當一束單色光通過一定濃度范圍的稀有色溶液時，溶液對光的吸收程度A與溶液的濃度c（g/l）或液層厚度b(cm)成正比。其定律表達式A=abc（a是比例系數）。當c的單位為mol/l時，比例系數用ε表示，則A=εbc稱為摩爾吸光系數。其單位為L·mol-1·cm-1它是有色物質在一定波長下的特征常數。T(透光率)=I/I0A(吸光度)= -lgT或A=K·C·L(比色皿的厚度)測定時，入射光I,吸光系數和溶液的光徑長度不變時，透過光是根據溶液的濃度而變化的，即“K”為常數。比色皿厚度一定，“L”、“I0”也一定。只要測出A即可算出“C”。        《分光光度計的表頭上，一行是透光率，一行是吸光度。》       

二、 722型分光光度計的使用        

1、將靈敏度旋鈕調至“1”檔（信號放大倍率zui小）。        

2、開啟電源，指示燈亮 ，選擇開關置于“T”，波長調至到測試用波長。儀器預熱20分鐘。          

3、打開試樣室（光門自動關閉），調節透光率零點旋鈕，使數字顯示為000.0。（調節T旋鈕），蓋上試樣室蓋，將比色皿架處于蒸餾水校正位置，使光電管受光，調節透光率旋鈕使數字顯示100.0。如顯示不到100.0，則可適當增加微電流放大的倍數。（增加靈敏度的檔數同時應重復（3）調節儀器透光率的“0”位）但盡量使倍率置于低檔使用。這樣儀器會有更高的穩定性。         

4、預熱后，按（3）連續幾次調整透光率的“0”位和“”的位置，待穩定后儀器可進行測定工作。      

三、 吸光度“A”的測量        

將選擇開關置于A 。調節吸光度調零旋鈕，使得數字顯示為零，然后將被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度值。       

四、 濃度c的測量        

將選擇開關由“A”旋至“C”將已標定濃度的樣品放入光路，調節濃度旋鈕，使得數字顯示為標定值，將被測樣品放入光路即可讀出被測樣品的濃度值。     

注意事項：       

1、測量完畢，速將暗盒蓋打開，關閉電源開關，將靈敏度旋鈕調至zui低檔，取出比色皿，將裝有硅膠的干燥劑袋放入暗盒內，關上蓋子，將比色皿中的溶液倒入燒杯中，用蒸餾水洗凈后放回比色皿盒內。

2、每臺儀器所配套的比色皿不可與其它儀器上的表面皿單個調換。 

使用方法  

（1）預熱儀器  將選擇開關置于“T”，打開電源開關，使儀器預熱20分鐘。為了防止光電管疲勞，不要連續光照，預熱儀器時和不測定時應將試樣室蓋打開，使光路切斷。  

（2）選定波長  根據實驗要求，轉動波長手輪，調至所需要的單色波長。  

（3）固定靈敏度檔  在能使空白溶液很好地調到“”的情況下，盡可能采用靈敏度較低的擋，使用時，首先調到“1”擋，靈敏度不夠時再逐漸升高。但換擋改變靈敏度后，須重新校正“0%”和“”。選好的靈敏度，實驗過程中不要再變動。  

（4）調節T=0%  輕輕旋動“0%”旋鈕，使數字顯示為“00.0”，（此時試樣室是打開的）。  

（5）調節T=  將盛蒸餾水（或空白溶液，或純溶劑）的比色皿放入比色皿座架中的*格內，并對準光路，把試樣室蓋子輕輕蓋上，調節透過率“”旋鈕，使數字顯示正好為“100.0”。  

（6）吸光度的測定  將選擇開關置于“A”，蓋上試樣室蓋子，將空白液置于光路中，調節吸光度調節旋鈕，使數字顯示為“.000”。將盛有待測溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格內，蓋上試樣室蓋，輕輕拉動試樣架拉手，使待測溶液進入光路，此時數字顯示值即為該待測溶液的吸光度值。讀數后，打開試樣室蓋，切斷光路。   重復上述測定操作1-2次，讀取相應的吸光度值，取平均值。  

（7）濃度的測定  選擇開關由“A”旋置“C”，將已標定濃度的樣品放入光路，調節濃度旋鈕，使得數字顯示為標定值，將被測樣品放入光路，此時數字顯示值即為該待測溶液的濃度值。  

（8）關機  實驗完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架用軟紙擦凈。 ?