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勁馬生物講解了流式抗體的選擇標準

來源:上海勁馬實驗設(shè)備有限公司   2014年03月13日 08:46  

由于在流式細胞實驗過程中,熒光抗體對單細胞懸液的標記效果直接影響實驗的數(shù)據(jù)質(zhì)量。因此,需要考慮各種影響流式抗體品質(zhì)及檢測效果的因素,例如抗體特異性、熒光素信號強弱、熒光素標記方式、同型對照等。那么該怎么選擇流式抗體呢,它有具體有哪些實驗注意事項等等,對此針對這一系列問題,上海勁馬生物公司特派技術(shù)人員來司受教,具體講解了流式抗體的選擇標準。

流式抗體的選擇:

1. 流式抗體本身也是抗體,所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇zui基本的條件:目標蛋白特異性,反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實驗。

2. 流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中,盡量減少實驗工序和過程,以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的范圍內(nèi),建議盡量用直接標記的抗體進行實驗而不去做間接標記。

3. 流式抗體熒光標記的選擇:如果實驗中檢測單一指標:不同熒光標記在不同的儀器上強度不同。FACS Calibur儀器為例:PE APC PE-Cy5 PerCP FITC PerCP-Cy5.5,通常來說,PEzui強,適用于弱表達抗原。FITC強度較弱,適用于強表達抗原,使用范圍比較廣。用戶需根據(jù)檢測的目標蛋白進行具體選擇。如果同時檢測多個指標:確認流式細胞儀能檢測多少個通道:流式抗體每個通道只能選擇1種熒光素。各個通道之間的熒光素可以隨意搭配。如:實驗者同時檢測三個指標,可以在圖1中綠色、黃色和紅色三個通道中各選一個適當(dāng)?shù)臒晒馑貥擞洠?span style="font-family:times new roman">FITCPEPE-cy5。切忌所有指標選擇同一個通道的熒光標記,以防止熒光的重疊和相互干擾,影響zui后結(jié)果。因此,流式細胞儀的通道越多,同一份樣本能同時做的表面/胞內(nèi)標志就越多。常用熒光標記包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。

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