Phos-tag™ 是一種能與磷酸離子特異性結(jié)合的功能分子，可與蛋白上的磷酸基團(tuán)結(jié)合。在SDS-PAGE中，在有二價(jià)金屬離子（Mn2+/Zn2+）參與的條件下，磷酸化蛋白與Phos-tag™ 結(jié)合，電泳遷移速度變慢，從而與非磷酸化蛋白分離。
Wako的SuperSep™ Phos-tag™ 是一種即開即用型的預(yù)制膠含有50 μmol/L的Phos-tag™ 丙烯酰胺，含有Zn2+ 作為金屬離子，保存穩(wěn)定性長達(dá)半年，得到的條帶整齊。多種規(guī)格型號，適合Bio-rad/Life Technolofies/EasySeperator等多種電泳儀。全批次均經(jīng)過嚴(yán)格檢驗(yàn)，保證能分離磷酸化與非磷酸化條帶。
應(yīng)用實(shí)例：
1. β-casein
使用Tris-gan氨酸（TG），Tris-Tricine（TT）或Tris-MOPS（TM）三種不同runningbuffer比較β-casein在SuperSepTMPhos-tagTM預(yù)制膠中磷酸化蛋白的遷移率。
2. 鼠腦來源Dnmt1磷酸化實(shí)驗(yàn)
從鼠腦提取液中純化得到GST-Dnmt1（1-290）結(jié)合蛋白，作為體外激酶實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)底物，在SuperSep™ Phos-tag™ 預(yù)制膠中檢測到了激酶的存在。
3. 二維電泳分析hnRNP K磷酸化異構(gòu)體
小鼠巨噬細(xì)胞J774.1 經(jīng)LPS 刺激后，裂解細(xì)胞，經(jīng)過免疫沉淀法分離得到hnRNP K。在二維電泳中，一維是IPG 膠，二維是SuperSep™ Phos-tag™ 預(yù)制膠，可分離hnRNP K 的異構(gòu)體。利用質(zhì)譜儀確認(rèn)不同的點(diǎn)代表不同的亞型或修飾蛋白。
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