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免疫組化非特異性染色的原因及避免方法有哪些呢?

時(shí)間:2023/11/1閱讀:615
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免疫組織化學(xué)技術(shù)是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)抗原或抗體物質(zhì)定性和定位的組織化學(xué)技術(shù)。 組織的非特異性染色的機(jī)理很復(fù)雜,所以控制非特異性背景染色也不容易, 非特異性染色的識(shí)別常出現(xiàn)在組織邊緣、膠原纖維及血漿滲出處,壞死組織及固定不良的組織中心處。表現(xiàn)為彌漫性,均勻性的背景染色。也可以是隨機(jī)分布的陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物點(diǎn)、團(tuán)或塊狀。免疫組化非特異性染色的原因及避免方法有哪些呢?一起來(lái)學(xué)習(xí)一下吧!
 1. 靜電吸附
抗體是一種帶負(fù)電荷的球蛋白,容易和帶正電荷的組織相結(jié)合。 在用第一抗體前加制備第二抗體動(dòng)物之非免疫血清封閉組織上的帶電荷基團(tuán),從而除去與第一抗體的非特異性結(jié)合。如果還不可以的話可能蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血。 
2. 內(nèi)源性過(guò)氧化物酶
紅細(xì)胞,粒細(xì)胞的含量尤其高,鏡下可以識(shí)別,不要將其當(dāng)成陽(yáng)性結(jié)果。 

石蠟切片 3%雙氧水-甲醇溶液處理切片;
 3. 洗滌不che底
保證各步驟的PBS或TBS沖洗的時(shí)間和量,方法要得當(dāng),最好可以把切片放在裝滿洗液的染色盒內(nèi)浸泡一段時(shí)間以確保充分清洗。有一些人鑒于實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)緊張,那吸管滴加標(biāo)本上沖洗,這樣很難保證沖洗的干凈與否。這實(shí)際是千里之堤,潰于蟻穴。 
4. DAB顯色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
最好是在顯微鏡下時(shí)時(shí)觀察一避免顯色回見(jiàn)過(guò)長(zhǎng)而引起的非特異性染色背景 
5. 一抗稀釋液

可以在一抗稀釋液內(nèi)適當(dāng)添加1%BSA或合適濃度的二抗來(lái)源的血清。

以上就是有關(guān)于免疫組化非特異性染色的原因及避免方法有哪些的問(wèn)題解答,如果你想了解更多請(qǐng)咨詢百奧創(chuàng)新客服哦~

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