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小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法

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更新時(shí)間:2017-08-08 16:41:43瀏覽次數(shù):131次

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產(chǎn)地 進(jìn)口 加工定制
適用領(lǐng)域 科研
小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法,冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。

產(chǎn)品名稱:小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法
英文名稱:Murine small bowel vascular endothelial cell culture medium
規(guī)格:100mL
產(chǎn)品貨號(hào):FS-X0472
小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法收到后的處理:
1)收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2)請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉?/a>。
培養(yǎng)操作流程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基(F-12K,GIBCO,貨號(hào)21127-022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;
      1,細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml*,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
      3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

20(S)-人參皂苷 F1    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    20(S)-Ginsenoside F1(3b,6a,12b)-3,6,12-Trihydroxydammar-24-ene-20-yl beta-D-glucopyranoside    含量:    ≥97%    規(guī)格:    20mg/支
20(S)-人參皂苷C-K    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    20(S)-Ginsenoside C-K    含量:    ≥97%    規(guī)格:    20mg/支
20(S)-人參皂苷F2    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    20(S)-Ginsenoside-F2    含量:    ≥97%    規(guī)格:    20mg/支
20(S)-*    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    Ginsenoside-Rg3    含量:    ≥97%    規(guī)格:    20mg/支
20(S)-人參皂苷-RH2    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    20(S)-Ginsenoside-RH2    含量:    ≥98%    規(guī)格:    20mg/支
23-羥基白樺酸    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    Anemosapogenin    含量:    ≥98%    規(guī)格:    20mg/支
25-羥基-原人參二醇    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    25-OH-Protopanaxdiol    含量:    ≥97%    規(guī)格:    20mg/支
25-羥基-原人參三醇    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    25-OH-Protopanaxtiol    含量:    ≥97%    規(guī)格:    20mg/支
2-羥基澤蘭內(nèi)酯    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    2-hydroxyeupatolide    含量:    ≥97%    規(guī)格:    20mg/支
3,6’-二芥子酰基蔗糖    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    3,6’-Disinapoyl sucrose    含量:    ≥95%    規(guī)格:    20mg/支
3’-甲氧基*    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    3’- Methoxy Puerarin    含量:    ≥99%    規(guī)格:    20mg/支
3’-羥基*    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    3'-hydroxy Puerarin    含量:    ≥97%    規(guī)格:    20mg/支
4-去甲氧基*    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    4'-Demethylpodophyllotoxin    含量:    ≥97%    規(guī)格:    20mg/支
5-O-甲基維斯阿米醇苷    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol    含量:    ≥98%    規(guī)格:    20mg/支
5-羥基*    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    5-HTP    含量:    ≥98%    規(guī)格:    20mg/支
6,7-二甲氧基/濱蒿內(nèi)酯    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    Scoparone    含量:    ≥98%    規(guī)格:    20mg/支
6-姜酚    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    6-Gingerol    含量:    ≥95% ≥98%    規(guī)格:    20mg/支
6-姜烯酚    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    6-Shogaol    含量:    94%    規(guī)格:    20mg/支
小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法6-羥基-7甲氧基    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    6-hydroxy-7-methoxy-2H-chromen-2-one     含量:    97%    規(guī)格:    20mg/支
7-乙基-10-*    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin    含量:    ≥98%    規(guī)格:    20mg/支
7-乙基*    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱     7-Ethylcamptotrecin    含量:    ≥95%    規(guī)格:    20mg/支
8-O-乙酰山梔苷甲酯    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    8-O-acetylshanzhiside methyl ester    含量:    97%    規(guī)格:    20mg/支
8-甲氧基補(bǔ)骨脂素/花椒毒素    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    8-Methoxypsoralen 8-甲氧基補(bǔ)骨脂素    含量:    ≥98%    規(guī)格:    20mg/支
8-姜酚    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    8-Gingerol    含量:    ≥95%    規(guī)格:    20mg/支
Rosiridin    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    Rosiridin    含量:    ≥95%    規(guī)格:    20mg/支
α-倒捻子素    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱    Alpha-Mangostin    

 

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