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人腎成纖維細胞*培養(yǎng)基操作方法

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更新時間:2017-08-07 16:23:10瀏覽次數(shù):134次

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產(chǎn)地 進口 加工定制
適用領(lǐng)域 科研
人腎成纖維細胞*培養(yǎng)基操作方法,冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。

產(chǎn)品名稱:人腎成纖維細胞*培養(yǎng)基操作方法
英文名稱:Amediumof human renalfibroblasts
規(guī)格:100mL
產(chǎn)品貨號:FS-X0247
人腎成纖維細胞*培養(yǎng)基操作方法的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復(fù)蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
人腎成纖維細胞*培養(yǎng)基操作方法收到后的處理:
1)收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉?/a>。
培養(yǎng)操作流程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備F-12K培養(yǎng)基(F-12K,GIBCO,貨號21127-022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
      1,細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml*,細胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
      3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

111830-201001    規(guī)格:    20mg/支
酸漿苦味素L    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別用    含量:    111831-201001    規(guī)格:    20mg/支
苷松新酮    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別用    含量:    111832-201001    規(guī)格:    20mg/支
6-姜辣素    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111833-201001    規(guī)格:    20mg/支
1-甲基海因    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別    含量:    111836-201001    規(guī)格:    20mg/支
去氫二異*    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111838-201001    規(guī)格:    20mg/支
川楝素    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111842-201001    規(guī)格:    20mg/支
安五脂素    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別用    含量:    111844-201001    規(guī)格:    20mg/支
23-乙酰澤瀉醇B    進口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量:    111846-201001    規(guī)格:    20mg/支
紫草氰苷    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別用    含量:    111847-201001    規(guī)格:    20mg/支
3,6-二芥子酰基蔗糖    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定    含量:    111848-201001    規(guī)格:    20mg/支
細葉遠志皂苷    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定    含量:    111849-201001    規(guī)格:    20mg/支
遠志口山酮    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定    含量:    111850-201001    規(guī)格:    20mg/支
桔梗皂苷D    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定    含量:    111851-201001    規(guī)格:    20mg/支
寶藿苷Ⅰ    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111852-201001    規(guī)格:    20mg/支
王不留行黃酮苷    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111853-201001    規(guī)格:    20mg/支
槲皮素-3-O-β-D- 葡萄糖    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111854-201001    規(guī)格:    20mg/支
偽原*(暫行)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111855-201001    規(guī)格:    20mg/支
巴豆苷    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111856-201001    規(guī)格:    20mg/支
新*    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111857-201001    規(guī)格:    20mg/支
絡(luò)石苷    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111858-201001    規(guī)格:    20mg/支
α-松油醇(暫行)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    鑒別    含量:    111859-人腎成纖維細胞*培養(yǎng)基操作方法201001    規(guī)格:    20mg/支
楊梅苷    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111860-201001    規(guī)格:    20mg/支
竹節(jié)參皂苷ⅠVa  (暫行)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量:    111861-201001    規(guī)格:    20mg/支
三百草酮    進口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    

 

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