小鼠白蛋白(ALB)試劑盒使用說明書

       -本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白蛋白(ALB)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠白蛋白(ALB)水平。用純化的小鼠白蛋白

(ALB)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白蛋白(ALB)，再與

HRP 標(biāo)記的白蛋白(ALB)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底

物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。

顏色的深淺和樣品中的白蛋白(ALB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD

值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠白蛋白(ALB)濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7 終止液

6ml×1 瓶

2 酶標(biāo)試劑

6ml×1 瓶

8 標(biāo)準(zhǔn)品（960μg/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板

4 樣品稀釋液

5 顯色劑 A 液

6 顯色劑 B 液

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

480μg/L

240μg/L

120μg/L

60μg/L

30μg/L

5 號標(biāo)準(zhǔn)品

4 號標(biāo)準(zhǔn)品

3 號標(biāo)準(zhǔn)品

2 號標(biāo)準(zhǔn)品

1 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月