1）ELISA邊緣效應是由溫育形成的。所以溫育一般采用能 使反應液溫度迅速達到平衡的水浴法。一種放在水浴箱的隔板上，另一種是放在溫箱的濕盒里。水要浸至板條的1/3處，不可將板條疊加放置。
2）邊緣效應（2ng/mlHBsAg一步法三種不同溫育法的結果）
洗滌
3）ELISA是靠洗滌來達到分離結合與未結合抗原抗體復合物及酶標記物的目的，同時洗滌也可將非特異吸附的蛋白質的干擾以及血球、細菌中的酶干擾清除掉。
4）手工洗滌一般采用浸泡方法：
（1）甩去孔內反應液；
（2）用洗滌液過洗一遍（即注滿孔后即甩去）；
（3）微孔重新注滿洗液后浸泡2-3分鐘，間歇搖動；
（4）甩去孔內液體，拍板，用紙吸干。
重復以上操作至少5次。注意各種試劑盒的洗滌液盡量不要混用。
洗板機洗板一定要預先把板架放平，使洗板機上的每個放液和吸液纖孔都能一致地插入孔底，將孔內液體全部吸干，同時要設置一定的 浸泡時間。如出現機洗后拍板有較多殘留液時應再用手工洗2次以上。關機前要用蒸溜水沖洗管道，避免堵孔。