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一站式*期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD)30 次操作步驟

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更新時間:2017-07-19 15:07:13瀏覽次數:134次

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一站式*期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD)30 次操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

一站式*期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD)30 次操作步驟產品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
一站式*期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD)30 次操作步驟詳細說明書:

一站式*期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD)30 次操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
一站式*期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD)30 次操作步驟對于培養細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
離析酶R-101RT

Phytagel 50g/100g/250g/500g Sigma P8169

銀片/銀,英文名或英文縮寫:Silver,級別:BR97%,規格:25

*;巴比通;巴比特魯;佛羅拿;5,5-二基巴比土醋;二基炳二酰脲 Bcrbitcl;5,5-Diqthyl-2,4,6(1H,3H,5H)-pyriMidinqtrionq;DiqthylMclonylurqc;Vqroncl;Mcloncl 27-44-3

喹諾酮,英文名或英文縮寫:2-xy7noxyinoneoline,級別:AR98%,規格:1
透析用玻璃紙100毫克保存:-20

61791-12-6聚氧醚(35)*Polyoxyl 35 Castor Oil

ANODEBUFFER陽極緩沖液,10X超純級1LRT

酵母膏 Yeast extract 8013-1-2 250G 培養基

2--3.6-二磺醋二內 Diwo7ium 2-ncphthol-3,6-disulfonctq 132-21-3
ACRIFLAVINE,NEUTRAL丫啶黃素超純級深橙色顆粒或粉末RTsigma

X-Glucoside 25mg原裝/100mg原裝 INALCO1758-0500

SDS-PAGE蛋白質中分子量shēng huà shì jì容量:100

4-溴本醇, 99% 4-Bromobqnzyl clcohol 873-72-6

N,N-二乙基甲先胺shēng huà shì jì容量:50毫克
CMA1 Others Human CMA1 / Chymase 1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人臍靜脈內皮細胞;HUV-EC-C

草魚腎細胞;GIK

T24細胞,膀胱移行細胞癌細胞 子宮高分化鱗癌細胞,HCC細胞 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0908

615小鼠滑膜肉瘤瘤株;ZM755

SELL Others Mouse 小鼠 SELL / CD62L / L-selectin 人細胞裂解液 (陽性對照)
人臍靜脈內皮細胞;HUV-EC-C

CMA1 Others Human CMA1 / Chymase 1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

草魚腎細胞;GIK

T24細胞,膀胱移行細胞癌細胞 子宮高分化鱗癌細胞,HCC細胞 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0908

615小鼠滑膜肉瘤瘤株;ZM755

SELL Others Mouse 小鼠 SELL / CD62L / L-selectin 人細胞裂解液 (陽性對照)
一站式*期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD)30 次操作步驟CD5 Others Mouse 小鼠 CD5 / LEU1 人細胞裂解液 (陽性對照)

人胰腺腺泡上皮癌;HPAC

EPHB4 Others Human EphB4 / HTK (aa 563-987) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

rRTEC, 大鼠腎小管上皮細胞 [CIP 104786]細胞 293 [HEK-293] (人胚腎細胞)

T淋巴瘤轉基因細胞;Jurkat D,E

RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞

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