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β- 巰基乙醇,蛋白級(jí)10mL操作步驟

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更新時(shí)間:2017-07-19 14:53:14瀏覽次數(shù):426次

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β- 巰基乙醇,蛋白級(jí)10mL操作步驟如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

β- 巰基乙醇,蛋白級(jí)10mL操作步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨(dú)配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn):
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍(lán)色,便于上樣時(shí)識(shí)別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。
β- 巰基乙醇,蛋白級(jí)10mL操作步驟詳細(xì)說明書:

β- 巰基乙醇,蛋白級(jí)10mL操作步驟對(duì)于組織樣品:
1. 把*切成細(xì)小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
β- 巰基乙醇,蛋白級(jí)10mL操作步驟對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細(xì)胞 2.1 對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2 秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。 2.2 對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
L---異白三肽100RT,避光

Peptonepeef 500g 國(guó)產(chǎn)

偏硅酸鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium metasilicate nonahydrate,級(jí)別:CP70%,規(guī)格:5

膽紅速(+4) Bilirubin 632-62-4

1-溴代正辛烷,英文名或英文縮寫:1-Bromooctane,級(jí)別:AR47.8%,規(guī)格:100
*25

302-22-7醋酸錄地孕酮Chlormadinone acetate

5-ami-nepxtxelenecarboxylic acid 32018-88-5

3- 3-Bromothiophenol ,98.0% 6320-01-0 1G 多肽試劑

纖維素酶R-10shēng huà shì jì容量:5
ABTSDIAMMONIUMSALTABTS, 二鹽超純級(jí)淺綠色精細(xì)粉末FROZENsigma

10125-13-0錄化銅(),二水;二錄化銅;錄化高銅;錄化銅Copper(ic)chloride;Copper dichloride;Copper bichloride;Cupric chloride

酸鉀250毫克保存:-20

4--3- 4-Fluoro-3-methylphenol,98% 452-70-0 1G 通用試劑

尿素酶(巨豆)/脲酶/大豆酵素/尿素()胺基水解酶/Urease(ja
STAT4 Others Human STAT4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4

CM-H029人臍帶單核細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

DU145細(xì)胞,前列腺癌細(xì)胞 涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞,Acc-3細(xì)胞 人整合SV40基因的上皮細(xì)胞;HBL-100 [HBL100]

615小鼠癌瘤株;Ca761

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4

STAT4 Others Human STAT4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

CM-H029人臍帶單核細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

DU145細(xì)胞,前列腺癌細(xì)胞 涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞,Acc-3細(xì)胞 人整合SV40基因的上皮細(xì)胞;HBL-100 [HBL100]

615小鼠癌瘤株;Ca761

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
β- 巰基乙醇,蛋白級(jí)10mL操作步驟人耐VP16絨癌細(xì)胞株;JEG-3/VP16 大鼠腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

腦成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

FCGR2A Others Cynomolgus 食蟹猴 CD32a / FCGR2A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

豚鼠肺細(xì)胞;GP-F1

T24, 人膀胱癌細(xì)胞

SRA01/04 人晶體上皮細(xì)胞

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