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細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒8次操作步驟

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更新時(shí)間:2017-07-18 16:19:11瀏覽次數(shù):136次

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細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒8次操作步驟如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過(guò)強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒8次操作步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨(dú)配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn):
1.
一站式,即開(kāi)即用,用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開(kāi)提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍(lán)色,便于上樣時(shí)識(shí)別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒8次操作步驟詳細(xì)說(shuō)明書:

細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒8次操作步驟對(duì)于組織樣品:
1. 把*切成細(xì)小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過(guò)強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒8次操作步驟對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細(xì)胞 2.1 對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒(méi)有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2 秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。 2.2 對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分 裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
ORANGEGwo7iumSALT橙黃G 鈉高純級(jí)100G1936-15-8RT

(N-乙酰-D-基葡萄糖)

5--2'-脫氧*核苷,英文名或英文縮寫:5-IDU,級(jí)別:BR85%,規(guī)格:50毫克

言醋本拂雷司 BqNFLUORqX xy7noCHLORIDq 360-78-0

*錄化物,英文名或英文縮寫:Cholesteryl chloride,級(jí)別:超純,99%,規(guī)格:1KU
維生素E測(cè)試盒shēng huà shì jì容量:RT個(gè)

26873-85-8聚蔗糖400Polysucrose

2-氧代丁酸鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium 2-oxobutyrate,級(jí)別:BR97%,規(guī)格:25

伊紅美藍(lán)瓊脂 Eosin-Methylene Blue Agar (EMB) Null 250G 培養(yǎng)基

焦碳醋二酯 Diqthylpyroccronctq 1609-47-8
5-腺苷二嶙酸二鈉鹽shēng huà shì jì容量:1公斤

4553-62-22-甲基戊二2-metxYLGLUTAROnitnILE

shēng huà shì jì容量:100

2-甲氧基乙氧基甲基 2-Methoxyethoxymethyl chloride,95.0% 3970-21-6 5G 通用試劑

龍腦 Borneol (98%,HPLC) 507-70-0 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品
CD2 Others Rat 大鼠 CD2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人男性正常細(xì)胞;Hs68

人輸尿管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

B16BL6細(xì)胞,小鼠黑色素瘤細(xì)胞 VERO C1008 (E6)(非洲綠猴腎細(xì)胞) EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM932

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113 His 標(biāo)簽)

SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人男性正常細(xì)胞;Hs68

CD2 Others Rat 大鼠 CD2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人輸尿管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

B16BL6細(xì)胞,小鼠黑色素瘤細(xì)胞 VERO C1008 (E6)(非洲綠猴腎細(xì)胞) EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM932

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113 His 標(biāo)簽)

SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒8次操作步驟ZR-75-1(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞(L929-TK-);LTK-

人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞cDNAHRPEpiC cDNA

TNFRSF1A Others Rat 大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

WB-F344細(xì)胞,大鼠肝上皮樣干細(xì)胞 HL-60(白血病原髓細(xì)胞) 大鼠肝細(xì)胞瘤;H4-II-E-C3

EFNA1 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

真皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

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