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96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 離心法 )5次實驗

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更新時間:2017-07-14 13:09:36瀏覽次數(shù):240次

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96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 離心法 )5次實驗使用方法 一、準(zhǔn)備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 離心法 )5次實驗后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。

96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 離心法 )5次實驗詳細(xì)介紹:

96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 離心法 )5次實驗產(chǎn)品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 離心法 )5次實驗使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/BisTEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr

GPHA2 Others Human GPHA2 / Glycoprotein hormone alpha 2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

CL-0069COS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

HL-60細(xì)胞,早幼粒急性白血病細(xì)胞系 T細(xì)胞淋巴瘤,Hurt-78細(xì)胞 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-C2

BHK-21(倉鼠腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

CTSA Others Human Cathepsin-A / CTSA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
REG4 Others Human REG4 / RELP / GISP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人口腔角質(zhì)細(xì)胞RNAHOK miRNA5 μg

豬腎細(xì)胞;LLC-PK1

THC-8307細(xì)胞,人高分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞系 人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素素瘤細(xì)胞,OCM-1A細(xì)胞 綠色熒光蛋白標(biāo)記人胃癌細(xì)胞;MGC803-GFP

HIC(人小腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

ACE2 Others Human ACE2 / ACEH 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人口腔角質(zhì)細(xì)胞RNAHOK miRNA5 μg

REG4 Others Human REG4 / RELP / GISP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

豬腎細(xì)胞;LLC-PK1

THC-8307細(xì)胞,人高分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞系 人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素素瘤細(xì)胞,OCM-1A細(xì)胞 綠色熒光蛋白標(biāo)記人胃癌細(xì)胞;MGC803-GFP

HIC(人小腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

ACE2 Others Human ACE2 / ACEH 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Anti-Phospho-eNOS (Ser1177) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化一氧化氮合成酶3抗體(內(nèi)皮型)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Anti-ZW10 peptide/FITC 熒光素標(biāo)記著絲粒蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體 Anti-Caspase-9 0.1ml

Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

Fbxw7 英文名稱: Fbxw7蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Pokemon 蒙蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-ZW10 peptide/FITC 熒光素標(biāo)記著絲粒蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Bio *標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FAM123B 英文名稱: 腎母細(xì)胞瘤基因X染色體蛋白抗體 0.2ml

兔抗瓜氨酸環(huán)肽抗體 Anti-CCP 0.1ml

Anti-NPPC/FITC 熒光素標(biāo)記促尿鈉排泄肽前體C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PNPO 磷酸吡哆醇氧化酶抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Phospho-Torc2/Crtc2 (Ser171)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 離心法 )5次實驗TLR-9/CD289(Human Toll-like receptor 9) ELISA kit Toll樣受體9Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-Follistatin 卵泡抑素抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/APC APC標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml

NON(Human nonmethylated oligonucleotide0 ELISA Kit 人非甲基化寡核苷酸 96T

SLITRK6 英文名稱: 神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK6抗體 0.2ml

CSMD3 英文名稱: CSMD3蛋白抗體 0.2ml

Anti-Follistatin 卵泡抑素抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

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