Southern Marker Oligo(DIG)20 次實(shí)驗(yàn)詳細(xì)介紹：

Southern Marker Oligo(DIG)20 次實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開即用，十分方便，免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對長度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
Southern Marker Oligo(DIG)20 次實(shí)驗(yàn)使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿（詳見該產(chǎn)品的使用手冊）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
Southern Marker Oligo(DIG)20 次實(shí)驗(yàn)后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
CM-H044人肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Beijing/22808/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

小鼠牙細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

NCI-H929-CMV-EGFP(穩(wěn)定株)人骨髓瘤細(xì)胞 NCI-H929-CMV-EGFP (stable strain) human myeloma cell 1640+20% FBS(熱滅活)

IL15 Protein Human 重組人 IL-15 / IL15 / Interleukin 15 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(HM) ( 5×105 ) 人海馬神經(jīng)元 Human
CAT Others Human 人 CAT / Catalase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人結(jié)膜成纖維細(xì)胞總RNAHConF tRNA

豚鼠心肌細(xì)胞;GP-H1

A-673細(xì)胞，橫紋肌瘤細(xì)胞 Hela細(xì)胞耐藥亞株,Hela/DDP細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-L1

雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7B5

CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人結(jié)膜成纖維細(xì)胞總RNAHConF tRNA

CAT Others Human 人 CAT / Catalase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

豚鼠心肌細(xì)胞;GP-H1

A-673細(xì)胞，橫紋肌瘤細(xì)胞 Hela細(xì)胞耐藥亞株,Hela/DDP細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-L1

雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7B5

CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Anti-TERT/FITC 熒光素標(biāo)記端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

ARIP2B(Activin receptor 2B) 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC24A5抗體 Anti-SLC24A5 0.1ml

SMC4 英文名稱： 染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白4抗體 0.2ml

eIF4EBP1 英文名稱： eIF4E結(jié)合蛋白抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-MBP(Tyr203) 磷酸化髓鞘堿性蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

ARIP2B(Activin receptor 2B) 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Goat Anti-Mouse IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 0.1ml

FLAD1 英文名稱： 黃素腺嘌呤二核苷酸抗體 0.2ml

CD19抗體 Anti-CD19 0.2ml

Anti-N-ras/FITC 熒光素標(biāo)記原癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PLK5 */*蛋白激酶5抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti- Beta-HCG/Gold 膠體金離子標(biāo)記小鼠抗人β亞基人絨毛膜*單抗IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Southern Marker Oligo(DIG)20 次實(shí)驗(yàn)HSP-70 ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白70Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-人T淋巴細(xì)胞亞群檢測盒 人T淋巴細(xì)胞亞群檢測盒 (T-Subset)Multi-class antibodies規(guī)格： 100人份

Rhesus antibody Rh FRMD8 FRMD8蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

Flt3(Mouse FMS-like tyrosine kinase 3) ELISA Kit 小鼠FMS樣酪酸激酶3 96T

Sodium / Hydrogen Exchanger 1 英文名稱： 鈉氫通道蛋白抗體 0.2ml

APC11 英文名稱： 細(xì)胞周期后期促進(jìn)蛋白亞基11抗體 0.2ml

Anti-人T淋巴細(xì)胞亞群檢測盒 人T淋巴細(xì)胞亞群檢測盒 (T-Subset)Multi-class antibodies規(guī)格： 100人份