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上海莼試生物技術有限公司
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細胞培養的操作步驟

時間:2017-12-4閱讀:113
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1. 細胞培養潛伏期(latent phase) :

接種 經過 懸浮期(細胞質回縮,胞體呈圓球形) 貼壁。

初代培養細胞 經過 10~24小時或更多時間。 連續細胞系和癌細胞系 經過 10~30分鐘 貼附。 貼附現象是一個非常復雜和受多種因素的影響。 影響細胞貼附:底物表面不干凈,影響細胞貼附。 利于細胞貼附:底物表面帶有陽性物質與特殊物質:
纖粘連蛋白(fibronectin FN)、 

細胞表面蛋白(cell surface proteinCSP) 

這些物質有的存在與細胞表面,有的來自血清。 

潛伏期特點: 

長短與細胞接種密度、種類、使用的培養基性質有關。 

(1)細胞貼附后進入潛伏期,細胞無增殖。少見分裂相,細胞有運動活動。 

(2)初代培養 細胞潛伏期約為24~96小時或更長, 

連續細胞系和腫瘤細胞潛伏期約6~24小時。 

(3)細胞接種密度大潛伏期短。

(4)細胞出現分裂相增多時,標志細胞進入指數增生期。

2.指數增生期(logarithmic growth phase): 

特點:細胞增殖旺盛階段,分裂相增多。

細胞分裂指數(mitotie index MI) : 

表示每1000個細胞中的分裂相數。 

條件:分裂相數與細胞種類、培養成分、pH培養箱溫度有關。

細胞分裂指數: 

初代細胞:在0.1%~0.5%之間% ,

連續分裂細胞和腫瘤細胞:3 ~5%。 

指數增生期是作為細胞一代活力的時期,是進行實驗和主要的階段。 

指數增生期持續3~5天,細胞數量增多后生長空間變小,細胞相互接觸可連接成片。

正常細胞:細胞相互接觸能抑制細胞運動,這種現象稱為接觸抑制(contact inhibition)。 

腫瘤細胞:沒有這種現象,可作為區別正常與腫瘤細胞的標志之一。當腫瘤細胞達到一定密度后向三維空間發展,使細胞發生堆積(piled up)。 

由于細胞不斷增殖分裂,細胞數量持續增多,培養液的營養成分減少,代謝產物增多,細胞受營養的枯竭和代謝物的影響,則發生密度抑制(Density inhibition),導致細胞分裂停止。 

3.停滯期(stagnate phase) 

細胞量和密度達到飽和,細胞停滯增殖。表明細胞進入到停滯期,細胞數量持平,也稱為平頂期(plateau)。 

特點:細胞不增殖,有代謝活動。培養液中的營養已逐漸耗盡,代謝產物積累增多,pH降低,此時需要傳代,否則細胞將會中毒,發生形態改變,細胞會從底物脫落死亡。 

注意:

細胞培養傳代過晚將影響下一代細胞的生長,至少要再傳 1~2代 ,通過換液淘汰死細胞和受損較輕的細胞。待細胞全部恢復后再用。
*標準品    1218-35-5     125mg    Xylometazoline Hydrochloride  
*標準品    1397-89-3    125mg        
*標準品    298-59-9     125mg        
鹽酸氟*庚酸酯標準品    3105-68-8     125mg        
*標準品    81403-68-1    150mg    Alfuzosin Hydrochloride    
*標準品        150mg    Amifostine    
甲磺酸溴隱亭標準品    22260-51-1    150mg    Bromocriptine Mesylate    
*標準品    1950/4/4    150mg    Cortisone Acetate    
敵敵畏標準品    62-73-7    150mg    Dichlorvos (AS)    
二羥苯宗標準品    131-53-3    150mg    Dioxybenzone    
恩他卡朋標準品    130929-57-6    150mg    Entacapone    
*標準品    57-63-6    150mg    Ethinyl Estradiol    
環丙羧酸標準品    86393-33-1     150mg    Fluoroquinolonic Acid  
細胞培養   

 

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