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詳解細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的實(shí)驗步驟

時間:2017/9/26閱讀:126
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細(xì)胞培養(yǎng)添加組分包括以下幾大類物質(zhì)
(1)促貼壁物質(zhì):許多細(xì)胞必須貼壁才能生長,這種情況下無血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴(kuò)展因子,一般為細(xì)胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,對許多細(xì)胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。 
(2)促生長因子及激素:針對不同細(xì)胞添加不同的生長因子。激素也是刺激細(xì)胞生長、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細(xì)胞*的,如胰島素。 
(3)酶抑制劑:培養(yǎng)貼壁生長的細(xì)胞,需要用*消化傳代,在無血清培養(yǎng)基中*須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。常用的是大豆*;抑制劑。 
(4)結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。 
(5)微量元素:硒是常見的。 
二、使用方法:目前,血清仍是動物細(xì)胞培養(yǎng)中基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長旺盛以后,再換成無血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細(xì)胞死亡,存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實(shí)驗后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細(xì)胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前,要留有種子細(xì)胞,種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。 
為了使細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)無血清培養(yǎng),關(guān)鍵的是使所培養(yǎng)細(xì)胞: 
●處于對數(shù)生長中期 
●>90% 活細(xì)胞率 
●適應(yīng)時以較高的起始細(xì)胞接種 
Tectorigenin    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    鳶尾黃素    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
Tectoridin    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    鳶尾苷(射干苷)    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
Schizandrin A    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    五味子甲素    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
Schizandrin B    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    五味子乙素    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
Schisandrin    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    五味子醇甲    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
Schizandrol B    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    五味子酯乙    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
Schizandrol A    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    五味子酯甲    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
細(xì)胞培養(yǎng)

 

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