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上海莼試生物技術有限公司
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詳解細胞培養領域的實驗步驟

時間:2017/9/26閱讀:128
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細胞培養添加組分包括以下幾大類物質
(1)促貼壁物質:許多細胞必須貼壁才能生長,這種情況下無血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子,一般為細胞外基質,如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質細胞、CHO細胞、成肌細胞等。 
(2)促生長因子及激素:針對不同細胞添加不同的生長因子。激素也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質,有些激素是許多細胞*的,如胰島素。 
(3)酶抑制劑:培養貼壁生長的細胞,需要用*消化傳代,在無血清培養基中*須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達到保護細胞的目的。常用的是大豆*;抑制劑。 
(4)結合蛋白和轉運蛋白:常見如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大,可增加培養基的粘度,保護細胞免受機械損傷。許多旋轉式培養的無血清培養基都含有牛血清白蛋白。 
(5)微量元素:硒是常見的。 
二、使用方法:目前,血清仍是動物細胞培養中基本的的添加物,尤其是在原代培養或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養液進行培養,待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養液。細胞轉入無血清培養基培養要有一個適應過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養。在降低過程中要注意觀察細胞形態是否發生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續保留,很少有細胞能夠長期培養于無血清培養基而不發生改變的。細胞轉入無血清培養之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規培養于含血清的培養基中,以保證細胞的特性不發生變化。 
為了使細胞培養適應無血清培養,關鍵的是使所培養細胞: 
●處于對數生長中期 
●>90% 活細胞率 
●適應時以較高的起始細胞接種 
Tectorigenin    含量:    進口/國產    鳶尾黃素    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規格:
Tectoridin    含量:    進口/國產    鳶尾苷(射干苷)    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規格:
Schizandrin A    含量:    進口/國產    五味子甲素    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規格:
Schizandrin B    含量:    進口/國產    五味子乙素    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規格:
Schisandrin    含量:    進口/國產    五味子醇甲    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規格:
Schizandrol B    含量:    進口/國產    五味子酯乙    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規格:
Schizandrol A    含量:    進口/國產    五味子酯甲    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規格:
細胞培養

 

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