高效液相色譜儀是利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。液相色譜儀在食品分析、環(huán)境分析、生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和無(wú)機(jī)分析等領(lǐng)域得到廣泛使用。一般來(lái)說，80%～85% 的有機(jī)物原則上可采用液相色譜儀分析。
高效液相色譜儀是以高壓下的液體為流動(dòng)相，并采用顆粒極細(xì)的固定相的柱色譜分離技術(shù)?，F(xiàn)如今，液相色譜法應(yīng)用非常廣泛，像是高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的有機(jī)化合物都可以用液相色譜儀來(lái)測(cè)定，比氣相色譜的局限性小很多。流動(dòng)相就像是一條延綿不斷的河流，從儲(chǔ)液瓶出發(fā)，經(jīng)過脫氣機(jī)，混合比例閥再到色譜柱，檢測(cè)器，最后流到了廢液桶。如果它不純凈或被污染的話，那整個(gè)液相都會(huì)波及到。下面小編就帶大家一塊來(lái)學(xué)習(xí)一下使用流動(dòng)相時(shí)的注意事項(xiàng)吧。
一、流動(dòng)相試劑的選擇：
1.色譜純。液相色譜儀所用的試劑必須是色譜純級(jí)別的，而且使用之前需要抽濾經(jīng)過0.45um或者0.22um的微孔濾膜，除去試劑中的細(xì)小顆粒和其他雜質(zhì)，以免溶劑殘留的雜質(zhì)在色譜柱長(zhǎng)期累積，降低柱效和壽命。
2.粘度。一般要求流動(dòng)相的粘度應(yīng)小于2cp，若使用高粘度溶劑，勢(shì)必會(huì)增高柱壓，不利于分離。常用的低粘度溶劑有乙腈、丙酮、乙醇等。
3.溶解性。溶劑對(duì)于待測(cè)樣品，必須具有合適的極性和良好的選擇性，符合相似相溶的原則，以免樣品沉淀在系統(tǒng)中特別是色譜柱中，日積月累降低柱效。
4.溶劑要與檢測(cè)器匹配。對(duì)于紫外吸收檢測(cè)器，應(yīng)注意選用的檢測(cè)器波長(zhǎng)比溶劑的紫外截止波長(zhǎng)要長(zhǎng)。截止波長(zhǎng)是指某一個(gè)特定的波長(zhǎng),超過這個(gè)波長(zhǎng)的紫外線,紫外檢測(cè)器對(duì)其幾乎不響應(yīng),或者說響應(yīng)很小。對(duì)于示差檢測(cè)器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動(dòng)相，來(lái)達(dá)到好的靈敏度。
5.緩沖鹽和PH。用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時(shí)，通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，來(lái)抑制樣品目標(biāo)物的解離，增加目標(biāo)物在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。一般樣品溶液是酸性時(shí)，會(huì)在流動(dòng)相中加入少量甲酸，醋酸或者磷酸來(lái)提高液相的分離度和改善峰形，但一定注意流動(dòng)相的PH在色譜柱的耐受酸堿度范圍內(nèi)。樣品溶液是堿性時(shí)則相反?？梢愿鶕?jù)目標(biāo)物的pKa來(lái)確定pH，根據(jù)pH選擇緩沖鹽的種類，常用的緩沖鹽溶液有乙酸銨，磷酸鹽，三乙胺等。
二、流動(dòng)相的儲(chǔ)存：
1.流動(dòng)相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。和waters液相配套的一般都是玻璃瓶。
2.流動(dòng)相的存放時(shí)間一般不超過24h，現(xiàn)配現(xiàn)用是安全的，特別是緩沖鹽溶液，如乙酸鹽等，極容易產(chǎn)生沉淀和滋生微生物長(zhǎng)霉。長(zhǎng)期積累的微生物會(huì)出現(xiàn)肉眼可見的絮狀“毛毛”粘附在溶劑濾頭上，損壞濾頭，然后進(jìn)入真空腔和比例閥甚至是色譜柱中，最終損壞一連串的儀器配件和耗材。因此緩沖鹽的流動(dòng)相最好是現(xiàn)配現(xiàn)用，抽濾脫氣(一般是超聲波脫氣)，不要貯存，使用完后仔細(xì)刷洗儲(chǔ)液瓶，然后準(zhǔn)備下一次的使用。
3.儲(chǔ)液瓶一定要蓋嚴(yán)，最好用原裝配套的蓋子，一是防止溶劑，特別是有機(jī)溶劑的揮發(fā)引起組分變化，導(dǎo)致保留時(shí)間的改變，二是防止二氧化碳溶入流動(dòng)相中，影響流動(dòng)相的PH值。
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