1.進樣系統
一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作進樣量是恒定的。
這對提高分析樣品的重復性是有益的。
2.輸液系統
該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X107Pa流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變包括改變洗脫液的極性、離子強度、pH值或改用
3.分離系統
該系統包括：色譜柱、連接管和恒溫器等。
色譜柱一般長度為10~50cm(需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管)內徑為2~5mm，由優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，柱內裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質和固定液構成)，固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性(如，硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性和比表面積大的特點，加之其表面經過機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)或者用化學法偶聯各種基因(如，磷酸基、季胺基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。
因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性，例如，在多孔性硅膠表面偶聯豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。
另外，固定相基質粒小，柱床極易達到均勻、致密狀態，極易降低渦流擴散效應。基質粒度小、微孔淺，樣品在微孔區內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據柱效理論分析，基質粒度小，塔板理論數N就越大。
這也進一步證明基質粒度小，會提高分辨率的道理。再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調到60℃通過改善傳質速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。
4.檢測系統
高效液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種：
(1)紫外檢測器
該檢測器適用于對紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測。
其特點:使用面廣(如，蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)；靈敏度高(檢測下限為10-10g/mL)；線性范圍寬;對溫度和流速變化不敏感；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。
(2)示差折光檢測器
凡具有與流動相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測器檢測。糖類化合物的檢測使用此檢測系統。這一系統通用性強、操作簡單，但靈敏度低(檢測下限為10-7g/mL)流動相的變化會引起折光率的變化。因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。
(3)熒光檢測器
凡具有熒光的物質，在一定條件下，其發射光的熒光強度與物質的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物(如，多環芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質等)的測定，其靈敏度很高(檢測下限為10-12~10-14g/mL）痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。
5.數據處理系統
該系統可對測試數據進行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。
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