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上海莼試生物技術有限公司
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確保ELISA檢測的正確性和準確性的一步

時間:2019/1/29閱讀:208
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正確的處理樣本是確保ELISA檢測試劑盒的正確性和準確性的一步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理辦法。
血清

血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。

用無熱原、無內毒素的試管或離心管收集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上,使血清分出。(將試管或離心管歪斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的分出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,細心搜集上清。主張將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。采血過程中應防止溶血,由于紅細胞裂解時會開釋具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為符號的
人鼠elisa試劑盒檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。一起也應防止細菌污染,由于菌體內可能含有內源性的HRP然后導致檢測的假陽性。
安排勻漿液

1)將安排樣本用PBS (0.01錨點錨點M, PH 7.4) 沖刷,洗去安排外表殘留的血液或雜質。

2)將安排塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應盡量小,便于勻漿得更充沛

3)將安排按必定的份額參加預冷的PBS(臨用前參加蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。

4)吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。
尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min,取上清即可檢測。總的來說,由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應確保一切樣本均為澄清的液體,沉積或懸浮物都應離心去除。為了確保檢測的準確性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內檢測;4℃保存的樣本應在1周內進行檢測。

細胞裂解液

1)吸去培育板內的培育基,用*消化細胞,加適量培育基將細胞從培育板上吹下來。懸浮細胞可省略。

2)搜集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培育基,用預冷的PBS潤洗3次。

3)參加適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前參加蛋白酶抑制劑)重懸細胞。一般6孔板一個孔的細胞量需求150~250μL PBS重懸。

4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,重復凍融幾回,使細胞充沛裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以到達裂解的意圖。

5)4℃ 10000×g 離心10min,除掉細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。

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