進口elisa檢測試劑盒檢測的函數曲線在實際操作過程中描述的是劑量濃度的抗體和信號之間的相關關系,而其實質是為了描述劑量濃度的抗體和對應抗原-抗體偶聯物之間的相關關系。抗原-抗體偶聯物經過了酶聯抗體反應和酶催化放大反應,催化產物檢測后轉換成信號。該信號間接的代表了抗原-抗體偶聯物。這種間接的轉化過程經歷了三重信號的傳遞過程,而只有在三重傳遞保證線性的情況,抗體濃度-信號劑量曲線才能等同于抗體濃度-抗體抗原偶聯物濃度劑量曲線,如果進行了非線性傳遞將會影響到整個檢測方法的真實性和準確性,下面小編將從微觀角度簡單介紹下信號傳遞過程中可能存在的偏差。
1.信號檢測偏差:酶催化產物轉換成信號時有可能會產生的偏差,這個偏差在一些文獻中也稱之為儀器的非線性檢測區域,即當酶催化產物濃度過高時,催化產物濃度和信號值之間不*呈線性關系,這個現象是普遍存在的,某品牌酶標儀的參數性能,注意該儀器的測量范圍是0-4 OD,而該儀器確保的檢測線性范圍是0-3 OD。一般來講在進行吸光度法讀數時,檢測的信號值gao值控制在3左右。如果兩個相鄰的抗體濃度點對應的信號值在OD值3.5及以上時都會特別接近,這兩個信號值很有可能是有信號傳遞偏差的。這個可以通過高濃度的酶催化產物梯度稀釋查看信號的線性范圍確認。
2.酶催化反應傳遞偏差:該偏差是由酶催化顯色液引起的,其實質是酶聯抗體的濃度和其對應催化產物的濃度是否線性相關。由于酶催化反應在未終止前是一個持續反應的信號放大過程,信號的產生是時間的累積量,在反應過程中酶活可能會喪失顯色液的有效成分在不斷的減少時,梯度濃度的酶催化反應在反應時間內的可能不會是勻速反應狀態。
這個可以通過動力學讀數進行確認。目前市面上有多種顯色液可供選擇,顯色能力qiang和弱的產品信號差異可能達到20-50倍,需要根據實驗的目的正確的選擇顯色液并確認酶催化過程的線性傳遞。
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