人源細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟
選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎，10-13天齡胚胎含有zui大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。
1. 胚胎的分離
   1） 適用哺乳動(dòng)物（倉(cāng)鼠、小鼠和大鼠）
a.采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物
b. 立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70%乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。若可能，置紫外燈下照射5min。
c. 用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后退。
 d. 用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，去除含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上
e. 剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的燒瓶中。
 f. 漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
   2） 適用雞胚胎
 a. 用70%乙醇擦洗雞蛋殼。
 b. 用無(wú)菌剪刀輕敲雞蛋的圓端，輕輕去除蛋殼露出氣囊。
 c. 用無(wú)菌鑷子去除覆蓋于絨毛尿囊上的白膜。
 d. 剪開(kāi)包膜，用彎鑷夾住胚胎頸部去除胚胎。
e. 棄頭部，將無(wú)頭的胚胎置于廣口燒杯中，用PBS漂洗。
2. 將6-8個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無(wú)菌廣口燒杯中，用新的無(wú)菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。
3. 在無(wú)菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一500ml的無(wú)菌的有攪拌棒的燒杯中，加入200-300ml用HBSS配制的0.25%的無(wú)菌*。
4. 在溫暖的環(huán)境中或置于37℃培養(yǎng)箱中輕輕攪動(dòng)15min。
5. 讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無(wú)菌大容積的離心管中，該管內(nèi)按照每10ml上清加入1ml牛血清的比例加入牛血清以滅火*。
6. 加入新鮮*溶液（見(jiàn)前述步驟）于含有殘留未消化組織塊的500ml燒杯中，重復(fù)步驟4和5。
7. 離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/min，5min，棄上清。
8. 用新鮮的無(wú)菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞，按步驟7再次離心。
9. 用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直*清清亮為止。
10. 用含有10%牛血清和抗生素（如*、*）的DMEM 10ml再懸沉淀，并使終體積為100ml。
11. 讓殘留的大塊未破碎的組織或特殊顆粒物質(zhì)沉降。可采用數(shù)層無(wú)菌紗布過(guò)濾細(xì)胞懸液以去除任何殘留的細(xì)胞快。
12. 為確定現(xiàn)有細(xì)胞濃度，加入0.2ml細(xì)胞懸液于1.8ml 1%醋酸溶液中以裂解紅細(xì)胞，用*進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
13. 按每10mm平皿1*107至4*107細(xì)胞的數(shù)量接種于10ml組織培養(yǎng)液中，在飽和濕度的37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育直至細(xì)胞鋪滿。
14當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿后，去除培養(yǎng)液，用10%的溫暖的Versene（用PBS配制的0.53nmol/L EDTA），洗滌細(xì)胞層2次。
15. 棄Versene，加入相同體積的溫暖0.05%*-EDTA。
16. 37℃孵育5min。
17. 用無(wú)菌吸管輕輕吹散人源細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至一含有1-2ml牛血清的無(wú)菌管中。牛血清的終濃度約為10%，起到中和*的作用。
18. 離心，1200r/min，5min，棄上清。
19. 再懸沉淀于5ml培養(yǎng)液中，另加入15ml培養(yǎng)液，分裝于2個(gè)100mm平皿中。
20. 置37℃飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞，直至細(xì)胞長(zhǎng)滿，繼續(xù)步驟14-20以傳代細(xì)胞。
容量：    RT    25克    shēng huà shì jì        氧化銪
容量：    RT，避光    5克    shēng huà shì jì        氧化銀
容量：        100毫克    shēng huà shì jì        氧化釔
容量：        500克    shēng huà shì jì        氧化亞銅
容量：    RT    25克    shēng huà shì jì        氧化型輔酶Ⅱ
容量：        100克    shēng huà shì jì        氧化型輔酶Ⅰ
容量：        100克    shēng huà shì jì        氧化銅絲
容量：    RT    25克    shēng huà shì jì        氧化銅粒
容量：        1公斤    shēng huà shì jì        氧化銅粉
容量：        25克    shēng huà shì jì        氧化鐵
容量：        25克    shēng huà shì jì        氧化鈰
人源細(xì)胞