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選擇Z適合的人源細(xì)胞增殖檢測方法

時(shí)間:2017-9-27閱讀:121
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人源細(xì)胞增殖檢測的應(yīng)用相當(dāng)廣泛,不論是測試藥物試劑還是生長因子的效果,不論是評估細(xì)胞毒性還是分析細(xì)胞活性狀態(tài),您都可能會(huì)用到它。細(xì)胞增殖檢測一般是檢測分裂中的細(xì)胞數(shù)量或者細(xì)胞群體發(fā)生的變化。細(xì)胞增殖檢測主要分為四類:DNA合成檢測、代謝活性檢測、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測和ATP濃度檢測。在這些方法中作何選擇,主要取決于您所研究的細(xì)胞類型和研究方案。

DNA合成檢測

DNA合成檢測是目前實(shí)驗(yàn)室中檢測細(xì)胞增殖zui準(zhǔn)確可靠的方式。傳統(tǒng)方法是,將放射性標(biāo)記的3H-胸腺嘧啶與細(xì)胞一同孵育幾小時(shí)或者孵育過夜。這樣新增殖細(xì)胞的DNA中就會(huì)摻入放射性標(biāo)記,經(jīng)洗脫后可用閃爍計(jì)數(shù)器SC檢測。該方法時(shí)間耗時(shí)長而且還有個(gè)明顯的弊端,那就是使用和處理放射性物質(zhì)既麻煩又不安全。不過,您還可以使用5-溴-2-脫氧尿苷BrdU來進(jìn)行類似實(shí)驗(yàn),因?yàn)锽rdU也同樣可以摻入到新合成的DNA中。不過這樣就需要進(jìn)行額外的實(shí)驗(yàn)步驟,先孵育特異性BrdU單抗和帶標(biāo)記的二抗,然后再進(jìn)行比色法、化學(xué)發(fā)光檢測或熒光信號(hào)檢測等步驟。該方法的好處就是讓您不需要再和放射性物質(zhì)打交道。BrdU標(biāo)記很適合免疫組化IHC、免疫細(xì)胞化學(xué)IC、細(xì)胞內(nèi)ELISA、流式細(xì)胞分析和高通量篩選。

代謝活性檢測

檢測細(xì)胞群體的代謝活性也可以反映細(xì)胞增殖的情況。在細(xì)胞增殖過程中乳酸脫氫酶的活性會(huì)增加,因此四唑鹽或者Alamar Blue在代謝活躍的細(xì)胞環(huán)境中會(huì)逐漸減少,形成能夠改變培養(yǎng)基顏色的甲臜染料。您可以通過低配置或高配置的分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀來讀取含染料培養(yǎng)基的吸光度,從而衡量細(xì)胞的代謝活性,檢測細(xì)胞增殖的情況。

四種zui常見的四唑鹽是:MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在標(biāo)準(zhǔn)的人源細(xì)胞培養(yǎng)基中是不溶的,而且其生成的甲臜晶體需要溶解在DMSO或者異丙醇中。因此,MTT主要作為終點(diǎn)檢測方法。其他三種鹽與Alamar Blue一樣,都是可溶且無毒的。它們可以作為連續(xù)監(jiān)控手段來跟蹤細(xì)胞增殖的動(dòng)態(tài)改變。其中XTT的效率較低,需要添加額外的因子。而WST1更靈敏有效,與其他鹽相比能夠更快顯色。Alamar Blue的靈敏度也很高,只要微孔板的孔中有100個(gè)細(xì)胞它就能夠檢測到。四唑鹽和Alamar Blue氧化還原染料能夠用于多種儀器和高通量研究,非常方便。它們適用的檢測儀器包括:標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)、熒光分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀等。
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人源細(xì)胞

 

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