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上海莼試生物技術有限公司
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腫瘤細胞計數板正確使用方法

時間:2017-9-1閱讀:329
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不同的腫瘤細胞培養密度不同,想知道細胞密度,就要在細胞培養之前進行細胞計數,下面為大家詳情解說一下細胞計數板正確使用方法:

1.視待測菌懸液濃度,加無菌水適當稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數可數為度。 

2.取潔凈的細胞計數板一塊,在計數區上蓋上一塊蓋玻片。 

3.靜置片刻,使細胞沉降到計數板上,不再隨液體漂移。將細胞計數板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩,先在低倍鏡下找到計數區后,再轉換高倍鏡觀察并計數。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應減弱光照的強度。

4.計數時若計數區是由16個大方格組成,按對角線方位,數左上、左下、右上、右下的4個大方格(即100小格)的菌數。如果是25個大方格組成的計數區,除數上述四個大方格外,還需數*1個大方格的菌數(即80個小格)。為了保證計數的準確性,避免重復計數和漏記,在計數時,對沉降在格線上的細胞的統計應有統一的規定。如菌體位于大方格的雙線上,計數時則數上線不數下線,數左線不數右線,以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細胞計入本格,本格的下線和右線上的細胞按規定計入相應的格中。見下圖:即本格中計數細胞為3個。

5.對于出芽的酵母菌,芽體達到母腫瘤細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2-3次(每次數值不應相差過大,否則應重新操作),按公式計算出每mL(g)菌懸液所含細胞數量。 

6.測數完畢,取下蓋玻片,用水將細胞計數板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干,放入盒內保存。
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腫瘤細胞

 

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