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上海莼試生物技術有限公司
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傳代時間-人源細胞和昆蟲細胞該怎么安排?

時間:2017/8/3閱讀:358
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細胞密度
人源細胞:貼壁培養細胞進入對數生長期、未達到匯合狀態時即應進行傳代。正常細胞達到匯合狀態時會停止生長(接觸抑制),重新接種后需要較長時間才能恢復。轉化細胞即使達到匯合狀態也能繼續增殖,但是在經過大約兩個倍增時間后通常會變質。類似地,懸浮培養的細胞進入對數生長期、未達到會和狀態時也應進行傳代。達到匯合狀態時,懸浮培養的細胞會聚集成團塊,轉動培養瓶時培養基會變得渾濁。
● 昆蟲細胞:昆蟲細胞進入對數生長期、未達到匯合狀態時應進行傳代。牢固貼壁的昆蟲細胞達到匯合狀態時也可傳代,雖然此時細胞更容易從培養器上解離下來,但是如果反復將昆蟲細胞在密度超過匯合的狀態下傳代,細胞的倍增次數會減少,活力會降低,貼壁能力也會下降。另一方面,將貼壁培養的昆蟲細胞在達到匯合狀態前傳代需要較大的機械力,才能使細胞從單細胞層中脫離。反復在達到匯合狀態前傳代,會導致細胞倍增次數減少,活力降低,健康度較差。

培養基耗竭
● 哺乳動物細胞:生長培養基pH值降低,通常表示乳酸蓄積,乳酸是細胞代謝的副產物。乳酸有細胞毒性,而且pH值減低也是細胞生長的不利因素。pH值改變的速度通常取決于培養體系中的細胞濃度,細胞濃度越高,培養基耗竭的速度越快。如果發現pH值迅速降低(>0.1-0.2 pH單位),同時細胞濃度增大,則應對細胞進行傳代。
● 昆蟲細胞:用于昆蟲細胞培養的生長培養基通常比哺乳動物細胞培養基酸度大。例如,用于Sf9細胞培養的TNM-FA和Grace 培養基的pH 值為6.2。與哺乳動物細胞培養過程不同,昆蟲細胞生長時培養基的pH值會逐漸升高,但一般不會超過6.4。但是,與哺乳動物細胞一樣,昆蟲細胞達到較高密度后生長培養基的pH值也會開始降低。

傳代時間安排
嚴格按照預定時間進行細胞傳代可確保細胞的生物學行為穩定,便于監測其健康狀態。從某一接種密度開始逐漸調整細胞接種密度,直到達到適合該細胞的穩定生長速度和產量。人源細胞偏離如此確定的生長模式通常表示細胞健康狀況不佳(例如:變質、污染)或者培養體系的某一組分功能異常(例如:未達到zuih 溫度、培養基過于陳舊)。我們強烈建議您保留詳細的細胞培養記錄,記錄加料和傳代時間、所用培養基種類、解離方法、分種率、形態學觀察結果、接種濃度、產量和抗生素用法。

按照傳代時間安排開展實驗和其他非常規操作(如更換培養基種類)。如果您的實驗安排與常規傳代時間安排不吻合,則應確保當細胞仍處于延滯期或者已經達到匯合狀態,停止生長時,不進行傳代。
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人源細胞

 

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