雙抗體夾心法檢測抗原
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的辦法，但要留意的是在一步法（待測抗原與酶標抗體一同參加反響）測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原別離和固相抗體及酶標抗體，而不再構成“夾心復合物”呈現鉤狀效應，乃至可不顯色而呈現假陰性成果。因而在使用一步法試劑測定標本中含量可反常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應留意可測規模的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。 雙抗體夾心法測抗原的另一留意點是類風濕因子（RF）的攪擾。RF是一種本身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充任抗原成份，一起與固相抗體和酶標抗體，表現出假陽性反響。雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能構成兩位點夾心。
雙抗體夾心法的扼要操作步驟為：
1）先參加抗體，使抗體固定于載體外表；
2）再加樣品，使方針檢測抗原構成抗原-抗體復合物；
3）加酶標抗抗體（第二種動物抗抗原的酶標抗體）；
4）參加酶促反響底物，發作顯色反響，顯色的深淺與待測抗原的量成正比。
競賽法檢測抗原
當小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的抗體位點，因而不能用雙抗體夾心法進行測定，能夠選用競賽法形式。辦法的基本原理可見圖2，經洗刷后分紅兩組：一組加酶符號抗原和被測抗原的混合液，而另一組只加酶符號抗原，再經孵育洗刷后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的不知道抗原的量。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
競賽法的扼要操作步驟：
1）先參加抗體，使抗體固定于載體外表；
2）參加梯度濃度份額的待測樣品與酶標抗原混合物,一起做只加酶標抗原的對照組；
3）參加酶促反響底物，發作顯色反響，比照實驗組及對照組的顯色區別，核算不知道抗原的量。
雙抗原夾心法檢測抗體
雙抗原夾心法的反響形式與雙抗體夾心法相似。用特異性抗原進行包被和制備酶物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不一樣之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因而其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常選用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不一樣，尋覓適宜的符號辦法。
雙抗原夾心法的扼要操作步驟為：
1）先參加抗原，使抗體固定于載體外表；
2）再加樣品，使方針檢測抗體構成抗原-抗體復合物；
3）加酶標抗原；
4）參加酶促反響底物，發作顯色反響，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。
間接法檢測抗體
間接法是檢測抗體常用的辦法。其原理為利用酶符號的抗抗體（辣根過氧化物酶符號的兔抗*抗體）以檢測與固相抗原的受檢抗體（*），故稱為間接法。本法首要用于對病原體抗體的檢測而進行流行癥的確診。間接法的長處是只需改換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體樹立檢測相應抗體的辦法。
間接法的扼要操作步驟：
1）將特異性抗原與固相載體聯合，構成固相抗原；
2）加稀釋的受檢血清，保溫反響。血清中的特異抗體與固相抗原，構成固相抗原抗-體復合物；
3）加酶標抗抗體；
4）參加酶促反響底物，發作顯色反響，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。
競賽法檢測抗體
競賽法測抗體的反響形式與競賽法測抗原相似。用特異性抗原進行包被和制備酶物，以檢測相應的抗體。當抗原材料中的攪擾物質不易除掉，或不易得到滿足的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競賽與固相抗原。標本中抗體量越多，在固相上的酶標抗體愈少，因而陽性反響呈色淺于陰性反響。如抗原為高純度的，可直接包被固相。競賽法測抗體有多種形式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競賽，抗HBc ELISA通常選用此法。另一種形式為將標本與抗原一同參加到固相抗體中進行競賽，洗刷后再參加酶標抗體，與在固相上的抗原反響。抗HBe的檢測通常選用此法。
競賽法的扼要操作步驟：
1）先參加特異性抗原，使抗原固定于載體外表；
2）參加梯度濃度份額的待測樣品與酶標抗體混合物，并做只加酶標抗體的對照組；
3）參加酶促反響底物，發作顯色反響，比照實驗組及對照組的顯色區別，核算不知道抗體的量。
捕獲包被法檢測抗體
捕獲包被法（亦稱反向間接法）ELISA，首要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。以現在zui常用的IgM測定為例，因血清中對于某種抗原的特異性IgM和IgG一起存在，則后者可攪擾IgM的測定。因而先將一切血清IgM（包含異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去掉IgG后再測定特異性IgM。IgM抗體的檢測用于流行癥的前期確診中。先用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標本中的IgM（其間包含對于抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后參加抗原，此抗原僅與特異性IgM相。繼而加酶符號對于抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標本中的IgM成正相關。此法常用于病毒性感染的前期確診。類風濕因子（RF）相同能攪擾捕獲包被法測定IgM抗體，致使假陽性反響。因而中和IgG的間接法近期頗受喜愛，用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。
捕獲法測抗體的扼要操作步驟：
1）特異性捕獲抗體的包被，先把能特異性待測抗原的抗體固定于固相載體外表；
2）參加待測樣品，通過固定在載體外表的對于該抗原的抗體固定于載體外表；
3）參加特異性抗原以及對于該特異性抗原的酶標抗體；
4）參加酶促反響底物，發作顯色反響，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。
ABS-ELISA法
除以上6種ELISA測試辦法外，近年在親和素-*體系上又發展出ABS-ELISA法 。親和素是一種糖蛋白，每個分子由4個能和*的亞基構成，*為小分子化合物。用化學辦法制成的衍*-羥基琥珀酰亞胺酯可與抗體或酶構成*符號產品，符號辦法較為簡潔，并且不影響抗體或酶原有的生物學活性。親和素*體系，簡稱ABS（avidin-biotin system）。由于親和素與*間的親和力*，敏捷，且極其安穩，使BAS符號技能比常規酶聯免疫、放射免疫及熒光免疫技能有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的路徑，大大提高了檢測的靈敏度，但該辦法比一般ELISA多用了兩種試劑，增加了操作步驟，因而在臨床檢驗中ABS-ELISA使用不多。ABS-ELISA法可分為酶符號親和素-*（LAB）法和橋聯親和素-*（ABC）法兩種類型。兩者均以*符號的抗體（或抗原）代替原ELISA體系中的酶標抗體（抗原）。
在LAB法中，將特異性抗體*化、酶分子符號在親和素分子上，*化抗體與被檢抗原后，再借BAS的高度親和力將酶分子聯合到抗原分子上，經酶促反響即可檢出抗原，因而提高檢測的敏感度。
ABC法相同將特異性抗體*化、酶分子標在*上，親和素和酶標*需求先按一定份額構成ABC復合物，這種網絡結構了很多的酶分子，當親和素尚未被酶標*飽滿時，*化抗體即可與之, 使被檢抗原、*化抗體和酶標*聯成一體。
