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動(dòng)物血清e(cuò)lisa試劑盒固體樣本處理原則

閱讀:86發(fā)布時(shí)間:2017-11-22

動(dòng)物血清e(cuò)lisa試劑盒固體樣本處理原則:稱(chēng)取1g的固體樣本,用9g的合適緩沖液溶解,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測(cè),細(xì)胞內(nèi)的蛋白,要先收集細(xì)胞,再用合適方法破碎,離心取上清測(cè)試。
1、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè),其余冷凍備用,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本
許多待測(cè)蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白,這個(gè)時(shí)候,要先收集細(xì)胞,洗滌干凈,再破碎細(xì)胞,離心取上清。
(1)培養(yǎng)的細(xì)胞
A、動(dòng)物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融(如果反復(fù)凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
B、植物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細(xì)胞,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)組織的細(xì)胞
切割標(biāo)本后,稱(chēng)取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎方法破碎細(xì)胞。
3、土壤:稱(chēng)取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標(biāo)本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè),其余冷凍備用,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測(cè)分泌蛋白,直接取上清檢測(cè),測(cè)試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。
4、動(dòng)物血清e(cuò)lisa試劑盒*:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解*頭部,搖勻,用鑷子取出*并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè),其余冷凍備用,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測(cè)分泌蛋白,直接取上清檢測(cè),測(cè)試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。
20mg/支    Chelerythrine    HPLC≥98%    白屈菜紅堿
20mg/支    Sanguinarine    HPLC≥98%    血根堿
20mg/支    Nitidine Chloride    HPLC≥98%    氯化兩面針堿
20mg/支    Homoharringtonine    HPLC≥98%    *
20mg/支    Gramine    HPLC≥98%    蘆竹堿
20mg/支    Reserpine    HPLC≥98%    *
20mg/支    Chrysin    HPLC≥98%    白楊素
20mg/支        HPLC≥98%    白楊素-6-C-葡萄糖基-8-C-阿拉伯糖甙
20mg/支    Camptothecine    HPLC≥98%    *
20mg/支    Euhorbiasteroid    HPLC≥98%    續(xù)隨二萜醇
20mg/支    Lathyrol    HPLC≥98%    千金子二萜醇
動(dòng)物血清e(cuò)lisa試劑盒

 


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