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公司動(dòng)態(tài)

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟

閱讀:187發(fā)布時(shí)間:2017-7-10

IL-2Relisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)
   的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的高質(zhì)量的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。

1.加樣
   加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。
2保溫
   在建立ELISA 方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)
1-2 小時(shí),產(chǎn)物的生成可達(dá)。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會(huì)造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應(yīng),邊上的值會(huì)偏高,建議為了客觀的判斷結(jié)果,將質(zhì)控放在非邊緣位置。
3洗滌
   洗滌在IL-2Relisa試劑盒過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。可以說(shuō)在ELISA 操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。
    洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時(shí),可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
洗板時(shí)注意IL-2Relisa試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋,應(yīng)按要求稀釋,所用的水電導(dǎo)率在1.5us/cm 之下,洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制。保證洗板浸泡時(shí)間為40 秒左右,孔內(nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越干凈洗滌效果更好,手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡。


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