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動物血清elisa試劑盒HRP的底物

閱讀:152發布時間:2017-6-21

動物血清elisa試劑盒HRP催化過氧化物的氧化反應,代表性的過氧化物為H2O2,其反應式如下:
DH2+H2O2D+H2O
上式中,DH2為供氧體,H2O2為受氫體。在ELISA中,DH2一般為無色化合物,經酶作用后成為有色的產物,以便作比色測定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基聯苯胺(3,3,5,5-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2-azino-di-(3-ethylbenziazobinesulfonate-6)]。
OPD氧化后的產物呈橙紅色,用酸終止酶反應后,在492nm處有zui高吸收峰,靈敏度高,比色方便,是HRP結合物zui常用的底物。OPD本身難溶于水,OPD·2HCl為水溶性。曾有報道OPD有致異變性,操作時應予注意。OPD見光易變質,與過氧化氫混合成底物應用液后更不穩定,須現配置現用。在試劑盒中,OPD和H2O2一般分成二組分,OPD可制成一定量的粉劑或片劑形式,片劑中含有發泡助溶劑,使用更為方便。過氧化氫則配入底物緩沖液中,有制成易保存的濃縮液,使用時用蒸餾水稀釋。*的動物血清elisa試劑盒中則直接配成含保護劑的工作濃度為0.02%H2O2的應用液,只需加入OPD后即可作為底物應用液。
TMB經HRP作用后共產物顯藍色,目視對比鮮明。TMB性質較穩定,可配成溶液試劑,只需與H2O2溶液混和即成應用液,可直接作底物使用。另外,TMB又有無致癌性等優點,因此在ELISA中應用日趨廣泛。酶反應用HCL或H2SO4終止后,TMB產物由藍色呈黃色,可在比色計中定量,zui適吸收波長為405nm。
ABTS雖不如OPD和TMB敏感,但空白值極低,也為一些ELISA試劑盒所采用。
另一種HRP的底物為3-(4-羥基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenlypropionicacid,HPPA],經HRP作用后,產物顯熒光,可用熒光光度計測量。用于ELISA的優點為可加寬定量測定的線性范圍。
HRP對氫受體的專一性很高,僅作用于H2O2、小分醇的過氧化物和尿素過氧化物(ureaperoxide)。H2O2應用zui多,但尿素過氧化物為固體,作為試劑較H2O2方便、穩定。動物血清elisa試劑盒供應尿素過氧化物片劑,用蒸餾水溶解后,在底物緩沖液中密閉、低溫(2~8℃)可穩定1年。


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