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小鼠*7α羥化酶ELISA檢測試劑盒說明書

閱讀:81發布時間:2017-08-10

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小鼠*7α羥化酶ELISA檢測試劑盒檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠*7α羥化酶(CYP7A1)捕獲抗體的微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠*7α羥化酶(CYP7A1)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),判斷樣品是否含有小鼠*7α羥化酶(CYP7A1)。
樣品收集、處理及保存方法
1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
酶標儀(450nm)
高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
操作注意事項
  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
  預處理后的樣本無需稀釋,直接取50μL加樣即可。
  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
  所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑的準備
 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
小鼠*7α羥化酶ELISA檢測試劑盒操作步驟
  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  設置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;
  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加*40μL;
  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗原100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
 1.  試驗有效性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;
                陰性對照孔OD值平均值≤0.20。
2.  臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.20
3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性
4.  陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性
試劑盒性能
1.  準確性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.20,說明試驗結果有效。
2.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
3.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
4.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
5.  有效期:6個月
免責聲明
1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
2.   小鼠*7α羥化酶ELISA檢測試劑盒嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。


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